[发明专利]一种人源诺如病毒免疫胶体金试剂盒及细胞株

说明书

本发明公开了一种人源诺如病毒免疫胶体金试剂盒，涉及分子生物学与免疫学领域，包括固相载体、检测抗体和样品处理液，其中固相载体包括样品垫、胶体金结合垫、具有检测线和质控线的承载膜、吸收垫及底板，胶体金结合垫包括结合垫本体和涂覆于结合垫本体上的胶体金标记抗体涂层；本发明还公开了相应的特异性细胞株。本发明通过人源诺如病毒S区衣壳蛋白抗体的制备，解决了现有技术制备工艺复杂、蛋白免疫学活性损失达、特异性差等问题，获得的单克隆抗体构建了人源诺如病毒的免疫胶体金检测体系，具有快速、简便、高效、检测谱广且更加安全的优点。

技术领域

本发明涉及分子生物学与免疫学领域，尤其涉及一种人源诺如病毒免疫胶体金试剂盒及细胞株。

背景技术

诺如病毒(noroviruses，NoVs)，曾称诺瓦克病毒(Norwalk virus)、类诺瓦克病毒(Norwalk-like virus)或小圆状病毒(small round structured virus，SRSV)，隶属于嵌杯科诺如病毒属成员，为单股正链RNA病毒。1972年Kapikian等利用免疫电镜的方法在1968年美国俄亥俄州Norwalk镇暴发的急性冬季呕吐症样品中首次发现了该病毒，并将其命名为Norwalk virus。此后陆续出现关于该病毒暴发的报道，导致该病毒命名混乱。2002年，国际病毒分类委员会(the International Committee on Taxonomy of Viruses，ICTV)将其归为嵌杯状病毒科，并正式更名为诺如病毒。

根据病毒主要结构蛋白核酸序列的不同，NoVs被分为7个组(GI-GVII)，其中GI、GII和GIV组NoVs可以感染人类，被称为人源诺如病毒(human noroviruses,HuNoVs)。流行病学数据表明：HuNoVs(GI和GII组为主)是造成急性非细菌性胃肠炎的最主要元凶，具有发病率高、感染剂量低、对外界抵抗力强等特点。美国疾控中心对该国的疫情监测结果表明，2009-2010年间共暴发1527起食源性疾病事件，其中790例疫情的病原体是HuNoVs，占总暴发事件的42％。2012年底，陆续在英国、荷兰、日本等国暴发了不同等级的HuNoVs流行事件。HuNoVs呈现出全世界范围频发且各地发病率出现逐年增高的趋势，与人们对其认识的深入、检测方法日益发展完善、灵敏度显著提高有关。

目前，HuNoVs的检测方法建立在病毒粒子外形、特异性核酸区段和主要抗原决定簇的基础上，主要有电镜法、免疫学方法和分子检测方法等。中国发明专利CN201510487540.1、CN201510179138.7、CN201310553678.8、CN201310271924.0等都是用于NoVs的分子检测。但是，这些发明专利和目前常用的HuNoVs检测方法的缺陷主要在于：1)均需要通过专门抽提RNA的步骤获得病毒核酸，费时费力；2)无法区别扩增模板RNA来源于感染性的NoVs粒子，还是样品中游离的病毒RNA；3)环境和食品样本中通常含有一些PCR抑制剂，容易造成假阳性结果；4)仪器设备昂贵，且对操作人员技能要求高。因此，研发一种广谱、特异性好、操作简单、快速且便携的HuNoVs检测试剂盒具有良好的应用价值和推广前景。