[发明专利]一种提高蚕卵重量的方法

说明书

本发明公开了一种提高蚕卵重量的方法。依照序列pQLTFTSGWGa，从C端(羧基端)向N端(氨基端)进行家蚕脂动激素A多肽合成；采用荧光素酶报告基因法检测合成的家蚕脂动激素A多肽活性；将家蚕脂动激素A活性多肽液过滤膜除菌，注射入化蛹后2‑3天的雌蚕蛹腹部，化蛾后正常交配，产下重量增加的蚕卵。本发明方法提高蚕卵重量，是通过新发现的活性多肽调控家蚕能量分配来实现的，这对于研究家蚕的能量分配机制、进一步提高蚕种质量等，具有积极作用。

技术领域

本发明涉及了一种提高蚕卵重量的活性多肽合成，尤其是涉及了一种提高蚕卵重量的方法。

背景技术

家蚕(Bombyx mori)是当今地球上室内饲养量最大的经济资源昆虫，它从桑叶中摄取各种营养物质，并通过代谢生理过程供给蚕体内各个组织器官而进行生长、发育、繁殖等，其中将营养物质供给卵巢以进行蚕卵制造。养蚕起源于中国，已有5000多历史，我国是世界上最大养蚕国，其传统产业优势明显。家蚕规模化饲养分为蚕茧生产和蚕种生产二种类型，蚕种生产的主要目的是获取优质、高产的蚕卵，它是蚕茧生产的基础。为此，采取各种方法提高蚕种质量，不仅是蚕种生产的重要技术措施之一，也是保障蚕茧生产稳产高产的重要条件，一直来受到人们的广泛重视。

家蚕体内的神经肽含量很低但活性很高，它由神经分泌细胞分泌后与靶细胞表面受体结合，在家蚕体的物质能量代谢等重要生理过程中发挥着重要的调控作用，是家蚕生命活动的重要调控因子。家蚕素/胰岛素相关肽是家蚕中首个被发现的神经肽，目前已经从家蚕基因组中鉴定到了近30多种神经肽以及一些异构体，预测家蚕有193个神经肽，其中73个发生了C端酰胺化，9个发生了酪氨酸的硫酸化，6个发生了N端环化。家蚕脂动激素是家蚕神经肽的一种，家蚕体的能量动态平衡与分配主要由脂动激素多肽调控，但有关家蚕脂动激素多肽通过能量分配来提高蚕卵重量等，均缺乏研究。

发明内容

为了解决背景技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种提高蚕卵重量的方法，是在我们从家蚕体中新发现的一种高活性的脂动激素多肽(取名家蚕脂动激素A多肽)的基础上，采用家蚕脂动激素A活性多肽的合成、活性分析检测、给化蛹后2-3天的雌蚕蛹腹部注射的方法，通过家蚕脂动激素A活性多肽的调控作用，提高蚕卵重量。

为了达到上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一、一种能提高蚕卵重量的活性多肽：

所述活性多肽的氨基酸序列为pQLTFTSGWGa，如SEQ ID NO.1。

二、一种提高蚕卵重量的方法：

1)按照氨基酸序列的氨基酸顺序，从C端(羧基端)向N端(氨基端)进行多肽合成，得到家蚕脂动激素A多肽合成液，家蚕脂动激素A多肽合成液中不含游离氨基，多肽纯度在98％以上。

所述的氨基酸序列为pQLTFTSGWGa，如SEQ ID NO.1；

2)采用荧光素酶报告基因法检测家蚕脂动激素A多肽的活性，活性EC₅₀值为2.87±0.37nM及以上；

3)给化蛹后2-3天的雌蚕蛹腹部注射100-150nM家蚕脂动激素A活性多肽，置于一定温度和一定湿度且昼明夜暗的环境中保护，待化蛾后正常交配，产下重量增加的蚕卵。

所述步骤1)具体为：

1.1)将氨基酸序列pQLTFTSGWGa中的每一个氨基酸预先用9-芴甲氧羰基(Fmoc)基团对α-氨基进行保护处理；

1.2)耦联反应：按氨基酸序列将一个已α-氨基保护的氨基酸通过对烷氧苄醇支臂共价连接到不溶性的对烷氧苄醇型树脂固相载体上，得到氨基酸--支臂--树脂；