[发明专利]一种推算金腰属植物基因组大小的方法

说明书

本发明公开一种推算金腰属植物基因组大小的方法。该方法包括以新鲜金腰属植物为材料、细胞核解离液配置、单细胞悬浮液制备、显微镜镜检、参照样本的选择，最终通过流式细胞仪推算出样品基因组大小的过程。本发明细胞核解离液配置简单，解离效率高，镜检效果明显，适用于金腰属各种植物的基因组大小的推算。为金腰的后续科学研究提供帮助，为金腰属植物的分类及开发应用研究奠定基础。

技术领域

本发明属于细胞生物学领域，具体涉及一种推算金腰属植物基因组大小的方法。

背景技术

金腰属植物为多年生小草本，常具鳞茎或者鞭匐枝。单叶，基生叶有互生和对生两种，具柄，无托叶。通常为聚伞花序，周围苞叶；花小型，绿色、黄色、白色或带紫色；托杯内壁通常多少与子房愈合；4萼片，在芽中呈瓦状排列；无花瓣，花盘极不明显或无，或明显(4)8裂，有时其周围具褐色乳头状突起；雄蕊8(10)或4；花丝钻形，花药2室，侧裂，花粉粒微细，具3拟孔沟，并具华美网纹；2心皮通常中下部合生，子房近上位、半下位或近下位，1室，胚珠多数，具2侧膜胎座，花柱2，离生，柱头具斑点。蒴果的2果瓣分为近等大或明显不等大两种；种子较多，卵球形至椭圆球形，有时光滑无毛，有时具微乳头状突起、微柔毛或微瘤突，有时具纵肋，肋上具横纹、乳头状突起或微瘤突等。染色体数目、基因组大小不明确。

金腰属植物全球约70种，亚、欧、非、美四洲均有分布，以亚洲温带分布为主。中国目前发现金腰属植物约40-45种(包括变种在内)，广泛分布于云南、西藏、四川、贵州、湖北、湖南、东北等二十多个省份。

金腰属植物药用种类较多，《中国植物志》、《中国药植图鉴》、《全国中草药汇编》以及各地中草药典籍均有关于本属药用植物的记载。本属药用植物多用于清热解毒、治疗肝胆病等。其在中国传统医药历史发展中得到广泛应用，藏药中称其为亚吉玛，藏医学者登增彭错著作《晶珠本草》中载有“亚吉玛生于高山石隙，味苦性凉，缓吐泻，治胆疾。”此外金腰属植物也在蒙医学著作《无误蒙药鉴》中也有记载。近年来研究表明金腰属植物普遍含有较高的黄酮类及三萜类化合物具良好抗肿瘤和抗病毒活性，其中从裸茎金腰C.nudicale中分离到的五环三萜对恶性褐色瘤(A375)、4种胃癌(ST-KM,KaTo-III,NKPS,KKLS)和膀胱癌(KK-47)都具较强抑制作用，且该属植物中特有且普遍存在的金腰酮B和金腰酮C(Chrysosplenol B,Chrysosplenol C)都有显著的抗病毒活性。以上生理活性表明金腰属植物值得进一步研究和开发。

自从首次的双螺旋结构被解析以来，测序技术已经成为了分子生物学领域的重要手段之一。对于每一个生物体，基因组作为遗传信息的载体能真实的反映该物种进化、遗传等各种信息，从而全面地揭示该物种基因组水平上的多样性和复杂性。因此，要想对一个物种进行全基因组水平上的了解，对该物种的基因组的测定显得十分必要。DNA测序技术经历了三代的发展。以Sanger的双脱氧链终止法和Maxam化学降解法为基础的为第一代测序技术。在这第一代技术当中，最普及的是Sanger的双脱氧链终止法，刚一上市备受欢迎，特点是技术原理简单、精确度高，缺点是操作过程复杂，时间周期较长且成本很高。自2005年以来，第二代测序技术以高通量、低成本、周期短等特点而非常受欢迎，代表的平台有Roche/454，Illumina/Hiseq，ABI/SOLID等，这让科研工作者在短时间内就可获得大量的数据成分可能，并使得数据库的数据呈指数增长，为生物信息研究人员提供丰富的数据资源。在一代和二代技术的改进基础上，以单分子测序技术为特点的第三代测序技术已经诞生，这种技术将具备更高的灵敏度和更长的读长。但是三代测序技术成本较高，对于高等植物的测序而言，在测序前估算植物样本的DNA含量是有效控制成本的重要手段。