[发明专利]一种用于稳定固相化蛋白的高分子聚合物及其制备方法和应用

权利要求书

1.甲氧基聚乙二醇-十六烷基醇-牛血清白蛋白(BSA)-葡聚糖复合物，其特征在于，具有式I所示的结构：

2.一种制备权利要求1所述的甲氧基聚乙二醇-十六烷基醇-牛血清白蛋白-葡聚糖复合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将葡聚糖氧化开环生成醛基，然后与赖氨酸反应，合成氨基化葡聚糖；

2)分别制备甲氧基聚乙二醇-对硝基苯基氯甲酸酯复合物和十六烷基醇-对硝基苯基氯甲酸酯复合物；

3)将步骤1)的氨基化葡聚糖和步骤2)的甲氧基聚乙二醇-对硝基苯基氯甲酸脂复合物和十六烷基醇-对硝基苯基氯甲酸脂复合物混合制备甲氧基聚乙二醇-十六烷基醇-葡聚糖复合物；

4)将步骤3)中的甲氧基聚乙二醇-十六烷基醇-葡聚糖复合物与牛血清白蛋白(BSA)合成最终的高分子化合物，即甲氧基聚乙二醇-十六烷基醇-牛血清白蛋白-葡聚糖复合物。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤1)包括以下步骤：

1-1)将葡聚糖溶于乙酸缓冲溶液中，磁力搅拌，充分溶解，加入高碘酸钠，避光，室温反应；随后室温下加入亚硫酸钠终止反应，用超滤管进行超滤处理，脱除小分子后，将醛基化葡聚糖用碳酸缓冲溶液复溶至原体积，以备后续使用；

1-2)将赖氨酸加入到醛基化葡聚糖中，搅拌均匀，室温反应，反应完成后，用盐酸调节溶液pH到7.5，在通风橱中将氰基硼氢化钠加入所述溶液中，室温反应，最后加入乙醇胺进行封闭，反应完成后超滤纯化，得到氨基化葡聚糖，以供后续使用。

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于步骤1-1)中葡聚糖分子量为10KDa-500KDa；乙酸缓冲溶液浓度为0.01-0.1M，pH为3.6-6；高碘酸钠与葡聚糖的质量比为1：20到4：1；亚硫酸钠与高碘酸钠的质量比为1：1到10：1；步骤1-2)中赖氨酸与醛基化葡聚糖的质量比为2:1到20：1；氰基硼氢化钠与醛基化葡聚糖的质量比为1：10到1：1。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于步骤1-1)中葡聚糖分子量为70Kda；乙酸缓冲溶液浓度为0.05M，pH为4.7；高碘酸钠与葡聚糖的质量比为4：5；亚硫酸钠与高碘酸钠的质量比为11：10；步骤1-2)中赖氨酸与醛基化葡聚糖的质量比为5：1；氰基硼氢化钠与醛基化葡聚糖的质量比为2：5。

6.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤2)包括以下步骤：

2-1)将甲氧基聚乙二醇溶于四氢呋喃溶剂中，加入三乙醇胺，搅拌均匀，将对硝基苯基氯甲酸脂加入到溶液中，搅拌均匀，室温反应，反应完成后正己烷沉淀，过滤后再用二氯甲烷进行重新溶解，用5％w/v柠檬酸洗涤，有机相用无水氯化镁进行干燥，过滤后，减压浓缩；通过正己烷进行沉淀，在4℃放置12h，随后进行过滤，真空干燥，得到聚乙二醇-对硝基苯基氯甲酸脂；

2-2)将十六烷基醇溶于四氢呋喃溶剂中，加入三乙醇胺，搅拌均匀，加入对硝基苯基氯甲酸脂，搅拌均匀，室温反应，用乙醇进行沉淀，三乙胺小分子溶解于乙醇中，过滤除去，得到粗品，用二氯甲烷进行重新溶解，用5％w/v柠檬酸洗涤，有机相用无水氯化镁进行干燥，过滤后，减压浓缩；通过滴加乙醇再次进行沉淀，在4℃放置12h，随后进行过滤，真空干燥，得到十六烷基醇-对硝基苯基氯甲酸脂，以备后续使用。

7.如权利要求6所述制备方法，其特征在于，所述步骤2-1)中，甲氧基聚乙二醇分子量从200到20000；三乙醇胺在溶液中含量从0.1％v/v到5％v/v；对硝基苯基氯甲酸脂与甲氧基聚乙二醇质量比从1：10到1：1；步骤2-2)中，三乙醇胺在溶液中含量从0.1％v/v到5％v/v；对硝基苯基氯甲酸脂与十六烷基醇质量比为1:1。