[发明专利]一种多价苯噻菌酯模拟表位多肽及其应用

说明书

本发明涉及一种多价苯噻菌酯模拟表位多肽及其应用，尤其是一种与苯噻菌酯单克隆抗体特异性结合的多价模拟表位多肽，以及所述多价多肽在免疫检测中的应用，属于生物技术领域。基于苯噻菌酯噬菌体展示多肽模拟表位的氨基酸序列，以赖氨酸为支架和间隔臂，固相合成获得多价模拟表位多肽；将多价多肽的氮端乙酰化，碳端的赖氨酸侧链提供唯一的游离氨基用于标记。这种多价模拟表位多肽与苯噻菌酯单克隆抗体的亲和力是单价模拟表位多肽的13.6倍，在均相免疫分析方法中可以显著降低检测方法的背景信号，提高检测分析方法的敏感性。该多价模拟表位多肽可作为化学合成半抗原的替代物，建立均相、一步的免疫检测方法，用于快速、灵敏、方便和经济的检测环境和农产品中残留的苯噻菌酯。

技术领域

本发明涉及一种多价苯噻菌酯模拟表位多肽及其应用，尤其是一种与苯噻菌酯单克隆抗体特异性结合的多价模拟表位多肽，以及所述多价多肽在免疫检测中的应用，属于生物技术领域。

背景技术

噬菌体展示多肽技术可快速筛选到与抗体特异性结合的多肽，用于高敏感性免疫分析方法的开发，目前已在农药、毒素等检测对象中得到广泛应用。但噬菌体展示获得的活性多肽片段连接在噬菌体外壳蛋白上，造成整体粒径较大(880×6-7nm)、流动性差、并且存在污染其它生物试剂的风险。此外，噬菌体作为一种非常规试剂，不同批次间差异大、长期储存的稳定性差等问题导致其商业开发价值低。目前研究者已报道出两种有效途径来克服噬菌体的弊端：1)化学合成多肽；2)多肽与其他蛋白进行融合表达。化学合成多肽凭借标记简单、纯度高、可长期储存、易商品化等优点，被视为克服噬菌体颗粒缺陷的有效途径。

噬菌体展示多肽技术以是以多拷贝形式将多肽展示在噬菌体外壳蛋白上，如pIII展示为3至5个拷贝，pVIII展示为200个拷贝左右。基于噬菌体展示多肽模拟表位的氨基酸序列，固相合成制备的单价无噬菌体模拟表位多肽的亲和力常常较低，从而无法在免疫分析方法中应用，或建立的免疫分析方法的敏感性较低。因此，多肽模拟表位多肽的研制及应用具有重要的现实意义和重要的社会、经济价值。

发明内容

本发明的目的是克服单价合成多肽模拟表位亲和力低的不足，提供一种与苯噻菌酯单克隆抗体特异性识别的多价模拟表位多肽，及其对环境或农产品中的苯噻菌酯进行免疫检测的用途。

本发明提供的一种多价苯噻菌酯模拟表位多肽，其特征包括：基于苯噻菌酯噬菌体展示多肽模拟表位的氨基酸序列(CSGLAEFMSC)，以赖氨酸为支架和间隔臂，固相合成获得多价模拟表位多肽；将多价多肽的氮端乙酰化，碳端的赖氨酸侧链提供唯一的游离氨基用于标记(((Ac-CSGLAEFMSC)₂K)₂KK)。

所述的苯噻菌酯多价模拟表位多肽在苯噻菌酯免疫检测中的应用。所述免疫检测方法为酶联免疫吸附分析方法、免疫层析分析方法或基于内滤效应的上转换荧光免疫分析方法。

本发明具有以下有益效果：

(1)新颖：与苯噻菌酯单克隆抗体特异性结合的多价模拟表位多肽为国内外首次报道；

(2)亲和力强：多价模拟表位多肽与苯噻菌酯单克隆抗体的亲和力是单价模拟表位多肽的13.6倍；

(3)实用：利用本发明提供的多价模拟表位多肽可作为化学合成半抗原的替代物，用于建立免疫分析方法，更加环保；

(4)改善分析方法的特性：在均相免疫分析方法中可以显著降低检测方法的背景信号，提高检测分析方法的敏感性。

附图说明

图1：多价苯噻菌酯模拟表位多肽示意图；

图2：质谱检测及分子量比对；