[发明专利]一种适用于高通量基因分型的水稻DNA样本的提取方法

权利要求书

1.一种适用于高通量基因分型的水稻DNA样本的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

提取双层生长板，所述生长板包括置于上方的96深孔板以及置于下方的96孔PCR板，所述96深孔板和所述96孔PCR板采用橡皮筋固定，所述96深孔板的每个孔底部有3mm的孔洞，所述96孔PCR板的管体中填充有蒸馏水；

将水稻种子播种于双层生长板中96深孔板的孔中，每个孔中放置一粒种子；

将播种后的双层生长板置于托盘中，所述托盘装有蒸馏水，保证水面淹没生长板下层的96孔PCR板；

将托盘置于30℃，12h光照的培养箱中培养9d，使得96深孔板中种子的根部能穿过底部孔洞延伸至96孔PCR板对应的孔中；

采用冷冻液将培养后的双层生长板进行冷冻处理；

冷冻处理后，取出双层生长板，并将双层生长板中的96深孔板和96孔PCR板分开，将含幼苗的96深孔板放置于蒸馏水中继续培养，下层含根部组织的96孔PCR板用于提取DNA。

2.根据权利要求1所述的适用于高通量基因分型的水稻DNA样本的提取方法，其特征在于，所述水稻种子使用前需进行预处理，即将水稻种子依次在70％乙醇中浸泡1min，2.5％次氯酸钠溶液中浸泡30min，然后消毒处理后，浸泡在水中1d，再用湿抹布包裹住种子催芽1d。

3.根据权利要求1所述的适用于高通量基因分型的水稻DNA样本的提取方法，其特征在于，将培养后的双层生长板96深孔板和96孔PCR板之间插入若干玻璃棒，使两层板之间产生空隙，然后再进行冷冻处理。

4.根据权利要求3所述的适用于高通量基因分型的水稻DNA样本的提取方法，其特征在于，将双层生长板的96孔PCR板与多孔金属热块插接后，将多孔金属热块置于冷冻液中进行冷冻处理，所述冷冻液的高度低于多孔金属热块的高度。

5.根据权利要求4所述的适用于高通量基因分型的水稻DNA样本的提取方法，其特征在于，所述冷冻液是由3kg干冰和500ml95％乙醇提取而成。

6.根据权利要求5所述的适用于高通量基因分型的水稻DNA样本的提取方法，其特征在于，所述冷冻处理的时间为6min，冷冻后分离PCR板，PCR板的孔中含有根部组织。

7.根据权利要求6所述的适用于高通量基因分型的水稻DNA样本的提取方法，其特征在于，在含有根部组织的PCR板每个孔中加入20ul pH为8.5的TRIS-EDTA溶液和200ul蒸馏水，将PCR板孔密封，放在高通量组织研磨机中6min 1500 RMP磨碎，再3600rmp离心10min，取上清液即为获取的DNA。

8.根据权利要求7所述的适用于高通量基因分型的水稻DNA样本的提取方法，其特征在于，所述的pH为8.5的TRIS-EDTA溶液为500mM TRIS水溶液和50mM EDTA水溶液按体积比为1:1混合后制得。