[发明专利]一种来源于骨髓间充质干细胞外泌体-阿霉素纳米靶向药物的制备及体外抗骨肉瘤的研究

权利要求书

1.一种来源于骨髓间充质干细胞外泌体-阿霉素在制备治疗骨肉瘤的纳米靶向药物中的应用，其中，所述来源于骨髓间充质干细胞外泌体-阿霉素是以来源于骨髓间充质干细胞的外泌体作为纳米载体装载化疗药物阿霉素。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述来源于骨髓间充质干细胞的外泌体的制备方法包括如下步骤：

（1）骨髓间充质干细胞的培养：间充质干细胞生长到融合度70%-80%时，更换无血清培养基培养48个小时，接着收集其培养基用于外泌体的提取；（2）外泌体的提取：将收集的培养基于4°C，3000g离心10分钟，用于清除细胞及细胞碎片；接着将外泌体提取试剂盒中的试剂按体积比为1:4的比例与培养基混合，涡旋震荡1分钟后常温放置2小时，接着将混合液于4°C，10000g离心60分钟用于分离外泌体，将上清液吸干净后，每10mL培养基用100uL PBS重悬，然后将重悬液置于外泌体纯化柱中于4°C，3000g离心10分钟获取最终外泌体。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述来源于骨髓间充质干细胞外泌体-阿霉素的制备方法步骤如下：将盐酸阿霉素粉末用无菌注射用水稀释至1mg/mL，接着将70ul1mg/mL的权利要求2制备的外泌体与930ul 1mg/mL盐酸阿霉素混合，静置30分钟后，加三乙胺去盐，常温放置60分钟后将混合液移至透析袋，于4°C过夜，计算其包载量和释放度。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述包载量和释放度计算的步骤如下：（1）包载量计算：将制备的来源于骨髓间充质干细胞外泌体-阿霉素置于酶标仪，于490 nm处测量其吸收峰，计算药物的包载量；（2）药物体外释放实验：将3 mL包载好的来源于骨髓间充质干细胞外泌体-阿霉素药物置于透析袋，并分别放置于pH7.4 与pH4.5的PBS溶液中，分别于1、 2、 4、 8、12、24 以及 36小时通过酶标仪测定阿霉素的浓度，计算药物的释放度。