[发明专利]一种基因工程菌湿细胞的收集与保存方法有效
| 申请号： | 201910486085.1 | 申请日： | 2019-06-05 |
| 公开（公告）号： | CN110229773B | 公开（公告）日： | 2021-08-24 |
| 发明（设计）人： | 张君轩;付妍;付雪蓉;解雨晨;任泓宇;刘立明;刘佳;陈修来 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N1/04;C12P13/04;C12R1/19 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 彭素琴 |
| 地址： | 214000 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基因工程 细胞 收集 保存 方法 | ||
1.一种基因工程菌株湿细胞的收集与保存方法，其特征在于，将基因工程菌株的发酵液降温至4～15℃，加入50～100mmol/L半胱氨酸和5～20μmol/L辅酶磷酸吡哆醛，混匀后6000～8000rpm离心5～10min获得湿细胞，将湿细胞置于-10～-20℃冷冻保存；所述基因工程菌株以大肠杆菌为宿主，共表达苏氨酸脱氨酶、甲酸脱氢酶和亮氨酸脱氢酶；所述离心温度为4～15℃。
2.如权利要求1所述的收集与保存方法，其特征在于，收集的湿细胞菌泥的含水量为75％～80％。
3.如权利要求1所述的收集与保存方法，其特征在于，所述苏氨酸脱氨酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述亮氨酸脱氢酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，所述甲酸脱氢酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。
4.如权利要求1所述的收集与保存方法，其特征在于，所述基因工程菌株中，用pETDuet-1质粒表达苏氨酸脱氨酶、甲酸脱氢酶，用pRSFDuet-1质粒表达亮氨酸脱氢酶。
5.如权利要求1所述的收集与保存方法，其特征在于，所述大肠杆菌为大肠杆菌(Escherichia coli)BL21。
6.权利要求1-5任一所述方法在生产L-2-氨基丁酸中的应用。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，基因工程菌株是以大肠杆菌为宿主，共表达苏氨酸脱氨酶、甲酸脱氢酶、亮氨酸脱氢酶三种酶，将基因工程菌株的发酵液降温至4～15℃，加入50～100mmol/L半胱氨酸，5～20μmol/L辅酶磷酸吡哆醛，混匀后6000～8000rpm离心5～10min获得湿细胞，以L-苏氨酸为底物，以得到的基因工程菌株湿细胞为全细胞催化剂生产L-2-氨基丁酸。
8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述基因工程菌株用于转化实验时，加入3.5-4.5倍体积15～25℃去离子水，自然解冻或25～50rpm低速搅拌解冻。
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