[发明专利]一种链霉素和新霉素多残留同时快速荧光检测试剂及应用

权利要求书

1.一种链霉素和新霉素多残留同时快速荧光检测试剂，其特征在于，所述试剂采用如下方法进行制备：将被分别用作链霉素和新霉素的信息传导试剂的具有相同材料内核及不同发射波长的两种量子点QD2和QD1分别与对链霉素和新霉素具有高特异性和高亲和性的适配体进行偶联，将该两种偶联物混合后加入氧化石墨烯，通过将该两种偶联物分别与氧化石墨烯构成荧光共振能量转移系统，制备出对链霉素和新霉素多残留进行同时快速荧光检测的试剂；所述量子点QD1和QD2分别是以巯基乙酸和巯基丙酸修饰的CdTe量子点，激发波长370nm，发射波长分别为548和580nm；对链霉素具有高特异性和高亲和性的适配体SAPT的核酸序列为5'-NH₂-(CH₂)₆-TAG GGA ATT CGT CGA CGG ATC CGC TCT GGG AGG TGC GGCTCT TTA CTC CTC CAA CGA CCC GGC TGC AGG TCG ACG CAT GCG CCG-3'；对新霉素具有高特异性和高亲和性的适配体NAPT的核酸序列为5'-NH₂-(CH₂)₆-TAG GGA ATT CGT CGA CGGATC CGC GTG TAG TAG CCT GAC CAA GGC GCC CAC CTC GAT TTA GTC TGC AGG TCG ACGCAT GCG CCG-3'。

2.如权利要求1所述的一种链霉素和新霉素多残留同时快速荧光检测试剂，其特征在于，所述试剂制备方法的具体步骤如下：

量取浓度分别为2.46×10^-5和1.62×10^-5mol/L的QD1和QD2各5μL，分别加入浓度为10g/L的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐10μL，用去离子水定容至40μL，分别进行活化；然后分别加入经变性处理的NAPT和SAPT，用pH7.4的磷酸盐缓冲液定容至400μL，进行偶联反应；将反应后溶液分别用50kD超滤管过滤，管中留存溶液分别用磷酸盐缓冲液定容至100μL，此SAPT-QD2和NAPT-QD1偶联物溶液构成链霉素和新霉素的复合荧光探针溶液，以QD2和QD1浓度计的偶联物浓度分别为810和1230nmol/L；

将适量SAPT-QD2和NAPT-QD1混合后加入氧化石墨烯GO，并用磷酸盐缓冲液稀释至其中GO的浓度为300mg/L，以QD2和QD1浓度计的SAPT-QD2和NAPT-QD1的浓度分别为81和123nmol/L，猝灭反应30min后即构成可用于链霉素和新霉素多残留同时快速荧光检测的试剂SAPT-QD2/GO和NAPT-QD1/GO。

3.如权利要求1所述的一种链霉素和新霉素多残留同时快速荧光检测试剂，其特征在于，所述高特异性是指SAPT除链霉素外，对包括新霉素在内的其它抗生素不具有识别作用，NAPT除新霉素外，对包括链霉素在内的其它抗生素不具有识别作用；所述高亲和性体现为SAPT对链霉素的解离常数为26.56±6.57nmol/L，NAPT对新霉素的解离常数为40.96±11.56nmol/L。

4.如权利要求1所述的一种链霉素和新霉素多残留同时快速荧光检测试剂，其特征在于，所述量子点QD1是按如下步骤制备：将0.0760g碲粉与0.05g硼氢化钠置于带有注射器针头的小瓶中，加入2mL去离子水，立即通入氮气5min，停止通气后立即盖上瓶塞，常温下反应4h得到紫红色NaHTe溶液；将0.2200g氯化镉置于250mL三颈瓶中，加入100mL去离子水，通入氮气30min，然后加入206μL巯基乙酸，并用1mol/L NaOH调节pH至11.2，加入新制备的NaHTe溶液，于95℃下回流冷凝2h得到巯基乙酸修饰的CdTe量子点，激发波长370nm，发射波长548nm。