[发明专利]一种基于质谱的完整N-糖肽相对定量方法

说明书

本发明涉及一种基于质谱的完整N‑糖肽相对定量方法，包括以下步骤：培养正常生理体系和患病体系的细胞，提取两种细胞体系的全部蛋白质组，富集两种细胞的完整N‑糖肽，使用同位素酯化反应对完整N‑糖肽C端进行标记，使用同位素二甲基标记技术对完整N‑糖肽N端进行标记，将两种标记后的完整N‑糖肽1:1混合，使用RPLC‑MS/MS进行检测，使用GPSeeker数据库搜索软件进行数据分析。与现有技术相比，本发明能够在完整N‑糖肽水平上对正常体系和患病体系进行分析，找出潜在的生物标志物，方法简明，鉴定准确。适用于基于质谱的完整N‑糖肽的定量分析。

技术领域

本发明涉及一种基于N-端和C-端等重标记和串级质谱成对碎片离子峰强度的完整N-糖肽相对定量方法，主要涉及与生物质谱相关的系统生物学、糖蛋白质组学等技术领域。

背景技术

蛋白质是生物体内生命活动的重要承担者，蛋白质的翻译后修饰对于蛋白质参与生物体内的生命活动有着重要作用。蛋白质组学通过对正常生物体系与疾病生物体系内的蛋白质组进行大规模检测，比较分析两种体系内的差异，可以找到某些疾病的生物标志物。目前定量分析的主要方法是通过同位素标记或者同重标记的方式对两种生物体系内的多肽进行标记，同位素标记技术主要是通过一级质谱的信号进行定量，同重标记是通过二级质谱报告离子的相对强度进行定量，相比于同位素标记，受杂质信号干扰小，准确度更好(Nicholson,J.K.；Lindon,J.C.；Holmes,E.,'Metabonomics':understanding themetabolic responses of living systems to pathophysiological stimuli viamultivariate statistical analysis of biological NMR spectroscopicdata.Xenobiotica 1999,29(11),1181-1189.；Nicholson,J.K.；Connelly,J.；Lindon,J.C.；Holmes,E.,Metabonomics:a platform for studying drug toxicity and genefunction.Nature Reviews Drug Discovery 2002,1(2),153-161.；Nicholson,J.K.；Wilson,I.D.,Understanding'global'systems biology:Metabonomics and thecontinuum of metabolism.Nature Reviews Drug Discovery 2003,2(8),668-676.)。