[发明专利]一种基于代谢组学分析鉴别松花粉原料的方法

说明书

本发明公开了一种基于代谢组学分析鉴别松花粉原料的方法，包括制备松花粉提取液，对提取液进行色谱检测和质谱检测，对检测数据分析处理确定松花粉标志性代谢产物以及对松花粉标志性代谢产物进行二级质谱检测。本发明的有益效果是：本发明通过乙醇提取松花粉代谢物进行UPLC‑QE‑MS分析，UPLC‑QE‑MS数据使用Compound Discover处理，再将数据导入SIMCA14.0软件，使用主成分分析、偏最小二乘判别分析和正交‑偏最小二乘判别分析进行多元统计分析，能够快速准确地寻找出不同表型松花粉的代谢产物，从而用于不用表型松花粉的区分鉴别。

技术领域

本发明涉及检测分析技术领域，尤其涉及一种基于代谢组学分析鉴别松花粉原料的方法。

背景技术

松花粉多指马尾松Pinus massoniana Lamb.、油松(Pinus tabulaeformisCarr.)、赤松(Pinus densiflora)、黑松等松科植物的雄性生殖细胞。松花粉在我国的应用历史千年有余。松科植物约110种，分布于欧洲、亚洲、北美洲、非洲北部。马尾松、油松、华山松等为我国特有的乡土树种，黑松原产日本进和韩国东部沿海地区，在我国辽宁、河北、河南、山东、江苏、浙江、江西及湖北等地大面积引种栽培。

松花粉有完全营养品之称，含有丰富的多糖、蛋白质、氨基酸、维生素、矿物质、膳食纤维、脂类、多肽、黄酮类、胡萝卜素、生长素等400多种生物活性物质。其中多糖(Polysaccharides)又称多聚糖，是由多个单糖分子脱水缩合而成的一类天然大分子物质，主要分为植物多糖、动物多糖和微生物多糖三种。它作为四大基本物质之一，与蛋白质、核酸和脂类共同维持机体的生命活动，具有免疫调节、抗病毒、抗癌、降血糖、美容等多种生物学活性。蛋白质(protein)是作为一类有机大分子，是生命活动的主要承担者。氨基酸(Amino acid)是蛋白质的基本组成单位。每一种蛋白质都是由多种氨基酸以不同比例组合而成的，并在体内不断进行代谢与更新。维生素(vitamin)是人和动物维持正常的生理功能必须从食物中获得的一类微量有机化合物，在人体生长、代谢、发育过程中发挥着重要的作用。矿物质(mineral)是地壳中自然存在的化合物或天然元素，和维生素一样，是人体必必需的元素。在人体具有重要作用，摄入不足或摄入过量都会引起相关疾病。黄酮类物质(flavone)和胡萝卜素(carotene)具有较高的抗氧化性，可以清除体内自由基、延缓衰老、提高免疫力等生物活性。

不同种类、不同产地、不同存储时长以及不同处理方式的松花粉成分存在细微的差别，如何对不同的松花粉进行准确的区分和定性尚存在一定的难度。

发明内容

本发明针对不同的松花粉不易区分的问题，提供一种基于代谢组学分析鉴别松花粉原料的方法。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种基于代谢组学分析鉴别松花粉原料的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)制备松花粉提取液

将松花粉与乙醇涡旋混合，经超声提取后置入离心机中离心，将上清液经过孔径为0.22μm的滤膜过滤，即得松花粉提取液；

2)色谱检测

将步骤1)所得松花粉提取液进行UPLC-QE-MS上样分析检测，色谱柱为ACQUITYUPLC BEH C18柱(2.1×50mm，1.7μm)，柱温30℃，进样流速为0.3μL/min，进样体积为2μL；

3)质谱检测

将步骤1)所得松花粉提取液进行质谱检测；

4)Compound Discover数据处理

使用Compound Discover软件对步骤2)和步骤3)所得检测数据进行提取、分析、整理，通过峰对齐、去卷积、降噪、归一化处理，得到原始数据矩阵；

5)SIMCA软件数据处理