[发明专利]人源靶向补体抑制物蛋白双突变体mCR2-mDAF及应用

说明书

本发明公开了一种补体抑制物DAF变异体，其与补体受体2变异体的融合蛋白以及所述融合蛋白在制备自身免疫性疾病治疗药物中的应用。所述DAF变异体是经过计算机模建、氨基酸置换后获得的分子改构体，DAF变异体与补体受体2变异体的融合蛋白比其野生序列融合蛋白有更高的配体结合与解离速率，具有更好的配体结合力。生物学分布实验证明，本发明提供的融合蛋白进入类风湿关节炎小鼠模型后可快速在关节炎部位高度聚集，具有显著的抗黏附/抗炎靶向抑制效应。在对MRL/lpr红斑狼疮小鼠的治疗中，所述融合蛋白能够显著提升小鼠的存活率，治疗组小鼠的蛋白尿、肾小球积分、间质炎症、血管炎和新月体/坏死等症状得到明显改善。

技术领域

本发明公开了一种融合蛋白，属于多肽技术领域。

背景技术

补体系统由30余种可溶性蛋白分子组成，是天然免疫系统的一部分，其组成成分包括补体固有成分、多种调节因子和补体受体等30多种分子。补体系统可通过3条既相对独立又相互联系的途径被激活，从而发挥调理吞噬、裂解细胞、介导炎症、免疫调节和清除免疫复合物等多种生物学效应。补体激活和其在靶结构上的沉积也可以间接地引起细胞或组织破坏。在补体途径中的各个点产生介导组织损害的补体激活产物。宿主组织上不适当的补体激活在许多自身免疫病和炎性疾病的病理学中起重要作用，并且也是造成与例如心肺炎症和移植排斥后的生物不相容性有关的许多病状的原因。补体抑制是治疗这些免疫介导的疾病和症状的潜在治疗方式。

补体激活的途径有3个，即经典途径、旁路途径和甘露聚糖结合凝集途径。参与补体经典激活途径的成分包括C1-C9。按其在激活过程中的作用，人为地分成三组，即识别单位(Clq、Clr、Cls)、活化单位(C4、C2、C3)和膜攻击单位(C5-C9)，分别在激活的不同阶段即识别阶段、活化阶段和膜攻击阶段中发挥作用。这3个阶段一般在靶细胞膜的3个不同部位进行。补体在激活过程中C2、C3、C4、C5均分别裂解成2个或2个以上的片段，分别标以a、b等符号，如C3a、C3b、C3c等。其中C2b、C3b、C4b、C5b直接或间接结合在靶细胞上，以固相的形式参与溶细胞过程，C3a、C5a游离在液相。补体在激活过程中，C5、C6、C7经活化后还可聚合成C567，并与C3a、C5a一起发挥特殊的生物学功能。旁路激活途径与经典激活途径不同之处在于激活是越过了C1、C4、C2三种成分，直接激活C3继而完成C5至C9各成分的连锁反应，还在于激活物质并非抗原抗体复合物而是细菌的细胞壁成分—脂多糖，以及多糖、肽聚糖、磷壁酸和凝聚的IgA和IgG4等物质。旁路激活途径在细菌性感染早期，尚未产生特异性抗体时，即可发挥重要的抗感染作用。甘露聚糖结合凝集途径由血浆中甘露聚糖结合凝集素(mannan-binding lectin，MBL)直接识别多种病原微生物表面的N-氨基半乳糖或甘露糖，进而依次活化MASP-1、MASP-2、C4、C2、C3，形成和经典途径相同的C3与C5转化酶，激活补体级联酶促反应的活化途径。MBL激活途径的主要激活物为表面含有甘露糖基、岩藻糖和N-氨基半乳糖的病原微生物。以上三种途径均能产生C3转化酶，C3分子被C3转化酶裂解为过敏毒素C3a以及具有调理作用的C3b，C3b分子能与糖蛋白表面的胺基与羟基共价连接，这种共价作用由C3b分子内部的硫酯基所介导。因而，C3b分子可吸附于侵入体内的微生物表面，再与补体受体1(CR1/CD35)结合，在血清H因子和I因子的作用下水解形成iC3b，iC3b随后被裂解为C3d。C3d片段是补体C3的不能再酶解的最小片段。结合C3d分子的微生物能与II型补体受体(CR2/CD21)结合。