[发明专利]电化学发光免疫测定方法及试剂盒

说明书

本发明提供一种电化学发光免疫测定方法，具体步骤包括：将样本、生物素化合皮质醇特异性抗体和吡啶钌标记的皮质醇衍生物充分反应，然后加入包被链霉亲和素的磁珠微粒进行孵育，得到抗原抗体磁性微粒复合体；将所述抗原抗体磁性微粒复合体吸入到测量池中并加入三丙胺，加电压发生ECL反应，使所述抗原抗体磁性微粒复合体化学发光，然后通过光电倍增器测量发光强度从而得出皮质醇的浓度。该方法方便迅速，实现了精确的全自动化。本发明还提供一种试剂盒，该试剂盒可实现标记物的再循环利用，发光时间长、强度高、易于测定，从而提高了检测灵敏度和线性范围，减少了高值标本稀释误差。

技术领域

本发明涉及免疫学技术领域，尤其涉及一种电化学发光免疫测定方法及试剂盒。

背景技术

皮质醇(氢化可的松)是机体最主要的糖皮质激素，对维持机体的多项生理机能有重要作用。与其它糖皮质激素类似，皮质醇由共同的胆固醇前体在肾上腺皮质束状带合成。血循环中约有90％的皮质醇与皮质类固醇结合球蛋白(CBG)和白蛋白结合后进行运输。仅有少量的游离皮质醇与其受体发生反应。

血清皮质醇的浓度具有昼夜节律性变化。通常最高峰值出现在清晨 (700nmol/L或25.4mg/dL)，随后逐渐降低，到夜间可降至峰值浓度的一半左右。因此在解释结果时，明确采血时间是很重要的。检测患者血循环中皮质醇的含量可用于诊断肾上腺、垂体和下丘脑的机能是否正常。因此检测血清皮质醇的浓度可用监测多种疾病，如浓度明显增高的库欣氏综合征或浓度明显降低的艾迪生病。同时也可用于库欣氏综合征使用地塞米松抑制治疗或艾迪生病使用激素替代治疗的疗效监测。

库欣氏综合征实验室诊断的另一选择是检测24小时尿液中的皮质醇浓度，因为尿液中排泄的皮质醇不受昼夜节律性分泌的影响。这种方法能够准确的区分健康人与库欣氏综合征患者。尿液中排泄的皮质醇均未与转运蛋白结合，因此被称为尿游离皮质醇(UFC)。通常尿游离皮质醇与血中具有生物活性的游离皮质醇具有一定的比例关系。

近来研究发现对于库欣氏综合征的诊断，检测夜晚唾液中的皮质醇比检测尿液游离皮质醇更有价值。检测夜晚唾液中的皮质醇特别适用于儿童、精神病患者以及由于不同的压力因素影响肾上腺皮质过度分泌肾上腺类固醇激素的个体。Elecsys皮质醇检测采用竞争法原理，使用特异性识别皮质醇的多克隆抗体。通过达那唑释放样本中与蛋白结合的内源性皮质醇，并与试剂中钌复合物a标记的外源性皮质醇衍生物竞争结合生物素链接的抗体。尿液检测可通过二氯甲烷萃取以降低其它物质的干扰。未经处理的唾液经过离心可直接检测。但上述方法通常存在敏感度低、成本昂贵、操作步骤繁琐等缺陷。

发明内容

由鉴于此，本发明确有必要提供一种电化学发光免疫测定方法及试剂盒，以解决上述问题。

本发明所采用的技术方案是：一种电化学发光免疫测定方法，具体步骤包括：

步骤1：将样本、生物素化合皮质醇特异性抗体和吡啶钌标记的皮质醇衍生物充分反应，得到预反应复合物；

步骤2：向所述预反应复合物中加入包被链霉亲和素的磁珠微粒进行孵育，通过所述生物素化合皮质醇特异性抗体与链霉亲和素的相互作用，将所述预反应复合物结合到所述磁珠微粒上，得到抗原抗体磁性微粒复合体；

步骤3：将所述抗原抗体磁性微粒复合体吸入到测量池中并加入三丙胺，加电压发生ECL反应，使所述抗原抗体磁性微粒复合体化学发光，然后通过光电倍增器测量发光强度，从而得出皮质醇的浓度。

基于上述，所述的电化学发光免疫测定方法还包括配制梯度浓度的标准溶液，根据发光强度变化值对数与浓度对数绘制剂量反应曲线，通过换算得出样本中的皮质醇的浓度。

基于上述，所述样本为血清、尿液或组织液。

基于上述，所述样本为有机化合物、核苷酸、核糖核酸、脱氧核糖核酸、单糖、多糖、氨基酸、多肽或蛋白质。