[发明专利]一种蛋白质免疫印迹膜重生液及其使用方法

说明书

本发明了提供了一种可以快速高效地去除蛋白质免疫印迹膜上结合的一抗和二抗，蛋白质免疫印迹膜重生液及其使用方法。并且在不需要重新进行电泳、转膜，不破坏膜上的转印的蛋白质的情况下，使蛋白免疫印迹膜可以重复使用。

技术领域

本发明涉及抗体检测领域，具体地说，涉及蛋白质免疫印迹技术。特别是蛋白质免疫印迹膜的重复利用。

背景技术

蛋白质免疫印迹方法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种技术，广泛应用于蛋白质表达水平的检测和鉴定。其步骤包括：（1）蛋白质凝胶电泳；（2）电印迹的方法将凝胶中的蛋白质转移到固相载体，如PVDF膜上；（3）一抗与固相载体上带有特定抗原决定簇的抗原进行特异性结合；（4）HRP酶标记过的二级抗体与一抗结合；（5）二级抗体标记物发生化学发光反应检测待测抗体的分子量与表达量是否与预期相符。

一般情况下，结合了蛋白质或抗原的固相载体只能进行一次蛋白质免疫印迹实验。在免疫学理论基础上，抗原抗体的结合是分子表面的非共价键结合，形成的复合物是不牢固的，在一定条件下（如低PH、高浓度盐等）可以解离。本发明人在不影响显影信号强弱的原则下，发明了这种可以快速高效地去除蛋白质免疫印迹膜上结合的一抗和二抗，并且在不需要重新进行电泳、转膜，不破坏膜上的转印的蛋白质的情况下，使蛋白免疫印迹膜可以重复使用的蛋白质免疫印迹膜重生液及其使用方法。

发明内容

本发明是一种高效实用的蛋白质免疫印迹膜重生液。

本发明所提供的蛋白质免疫印迹膜重生液，由A液和B液两组分构成。

所述A液包括的组分的含量为：

1% 考马斯亮蓝，

35%-45% 甲醇溶液，

10% 乙酸溶液，

44%-54% 的双蒸水溶液；

所述B液包括的组分的含量为：

95%-100% 甲醇溶液，

0%-5% 双蒸水溶液。

本发明所述的蛋白质免疫印迹膜重生液可按下述工艺过程进行，包括如下步骤：所述A液的配制：（1）量取400 ml双蒸水溶液，加入100 ml乙酸溶液和350 ml-450 ml 的甲醇溶液；（2）称取10g考马斯亮蓝粉末，加入步骤（1）的溶液中使其溶解，充分混匀；（3）用双蒸水将步骤（2）得到的液体定容至1L，充分混匀得蛋白质免疫印迹膜重生液A液，常温保存。

所述B液的配制：（1）量取0 ml-50 ml双蒸水溶液；（2）用100%的甲醇溶液将步骤（1）液体定容至1L，充分混匀得蛋白质免疫印迹膜重生液B液，常温保存。

本发明所提到的重生液A液为抗原抗体复合物提供了一种适合的解离环境，A液中过量的考马斯与环境中所有蛋白质通过离子键或疏水作用结合，将一抗二抗替换下来，达到抗原抗体复合物充分解离的目的。解离后的抗原或抗体分子，仍保持原来的理化特性及生物学性状。

本发明所提到的重生液B液的作用是将A液从免疫印迹膜上洗脱下来。

本发明提供的蛋白质免疫印迹膜重生液主要有以下几点优势。

1、可以使一张转印了多组织细胞裂解液样本的蛋白质免疫印迹膜重复使用多次。

2、对于实验的稳定性而言，本发明可以减少实验步骤，不需要上样、跑胶及转膜等实验步骤，用同一张蛋白质免疫印迹膜用多种组织对不同抗体的进行检测，给实验带来方便。

3、可以适用于去除以聚偏二氟乙烯膜（PVDF膜）为蛋白质固相载体的蛋白质免疫印迹膜上结合的一抗和二抗。