[发明专利]系统性硬化症诊断的脂肪酸代谢物分析检测方法

说明书

本发明涉及一种系统性硬化症诊断的脂肪酸代谢物分析检测方法，样品预处理后，采用超高效液相色谱UHPLC进行分离，色谱条件为：柱温25℃；流速0.3mL/min；进样量2μL；流动相组成A：水+25mM乙酸铵+25mM氨水，B：乙腈；梯度洗脱。采用随机顺序进行样本的连续分析，样本队列中插入质控QC样品，用于监测和评价系统的稳定性及实验数据的可靠性；样品经超高效液相色谱UHPLC分离后用质谱仪Q‑TOF进行质谱分析。实验证明，本发明分析速度快、灵敏度高、分辨率高，适用于系统性硬化症诊断的脂肪酸代谢物检测分析。

技术领域

本发明涉及代谢组学领域，具体涉及一种系统性硬化症诊断的脂肪酸代谢物分析检测方法。

背景技术

系统性硬化症(Systemic sclerosis,SSc)，也被称为硬皮病(scleroderma)，是一种以局限性或弥漫性皮肤增厚和纤维化为主要特征，可引起多系统损害的结缔组织病。在亚洲，SSc的发病率为7.2/1000000-10.9/1000000人，患病率为38/1000000-56.3/1000000人，女性发病明显多于男性。根据皮肤受累程度，临床上常将SSc分为局限型SSc(lcSSc)，皮肤增厚局限于手肘或膝盖的远端，内脏器官受累较少；弥散型SSc(dcSSc)，皮肤受累范围广泛，在早期即可有严重的内脏受累等并发症。

纤维化作为系统性硬化症患者主要的死亡原因，每年可造成巨大的社会经济影响。根据相关文献报道，SSc患者的死亡率明显高于一般人群，其五年生存率为74.9％，10年生存率为62.5％。该病发生后，既会对患者的皮肤、关节肌肉造成侵犯，包括皮肤硬化、指端溃疡、甲褶微循环异常、食管功能障碍等，更为重要的是，还会对患者的内脏器官造成损伤，如侵犯患者的肺、肾、心脏等，造成肺动脉高压、肺纤维化、肾危象、心功能不全等，严重影响患者生存质量和威胁患者生命。

SSc的主要特点为固有免疫和适应性免疫功能异常以及微血管损伤，最后导致细胞外基质和胶原的过度产生和堆积。肌成纤维细胞作为纤维化形成的主要参与细胞，也是胶原的主要生产者，其在机体创伤修复过程中起着连接受损组织的作用。随着修复的进行，肌成纤维细胞和胶原含量也逐步下降，但在纤维化疾病，如SSc中，肌成纤维细胞可持续分泌胶原，导致皮肤、肺脏等组织纤维化的形成。间质固有成纤维细胞、间充质细胞、内皮细胞、上皮细胞、周细胞等均可转为肌成纤维细胞，此过程主要依赖转化生长因子β(TGFβ)参与。

SSc的发病机制尚不清楚，目前认为在遗传和环境的作用下，自身免疫和炎症反应、血管病变、纤维化三者相互影响而形成恶性循环，最终导致各器官进行性纤维化。全基因组关联研究已筛选出大量SSc易感基因，如人类白细胞抗原(HLA)-DPB1、HLA-DPB2、HLA-DQB1、干扰素调节因子5、信号转导与转录激活因子4等。血管内皮细胞、CD4+T淋巴细胞和成纤维细胞的功能异常均参与了SSc的发生发展，但这些指标因受到临床检测技术或费用的局限，仍很难作为常规诊断SSc的生物学标记物。

作为一种典型的自身免疫病，自身抗体在SSc的诊断和预后评价中发挥重要作用。2013年美国风湿病学会/欧洲风湿病联盟(ACR/EULAR)发布了最新的SSc分类诊断标准，强调了自身抗体在SSc诊断过程中的重要性。约95％的SSc患者存在抗核抗体，其中，抗拓扑异构酶I抗体(Scl-70)和抗着丝点抗体(ACA)是SSc中发现的经典的抗核抗体，广泛应用于疾病诊断。尽管如此，目前使用的SSc血清自身抗体标志物并不十分理想，抗Scl-70抗体临床检测阳性率仅为30-40％，鉴于疾病本身的异质性及多变性，目前学者们仍在致力于寻找SSc早期诊断的血清学标记物。