[发明专利]一种三萜皂苷质谱结构解析方法

说明书

本发明涉及一种三萜皂苷质谱结构解析方法，将样品进行不同碰撞能下的正离子模式下的二级质谱分析，然后进行不同碰撞能下的负离子模式下的二级质谱分析，利用正离子和负离子模式下不同碰撞能诱导的二级质谱子离子碎片特征进行三萜皂苷类化合物的糖链组成和结合位点的结构解析。可快速实现三萜皂苷糖基和结合位点的准确鉴定。

技术领域

本发明属于涉及分离分析化学领域，具体涉及一种三萜皂苷质谱结构解析方法。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

三萜皂苷类化合物是一类由三萜母核和糖基构成的糖苷类天然化合物，具有抗肿瘤、抗衰老、抗疲劳、调节免疫力等作用。这类化合物广泛存在于人参属植物之中，如人参、西洋参等。三萜皂苷的糖链结构十分复杂，包括六碳糖、五碳糖、脱氧六碳糖等，常见的有葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸等。常见的三萜皂苷有两个糖链，这两个糖链可能由相同的糖基组成，也可能由不同的糖基组成，由单糖、二糖、三糖组成。糖链在三萜母核上有不同的结合位点。人参属植物中存在大量的四环三萜皂苷，其常见的结合位点有C-3，C-6和C-20，结合位点的不同会引起其活性的显著不同。

质谱灵敏度高、分辨率好，在植物三萜皂苷类化合物分析中得到广泛应用。液相色谱超高效的分离能力与质谱技术联用为三萜皂苷的高通量分析带来了可能。发明人发现，三萜皂苷结构复杂、种类繁多，常常没有商品化的标样，给其糖链组成和结合位点的准确定性带来了困难。常用的单一碰撞能量、单一离子化模式的二级质谱分析手段往往不能准确鉴别其结合位点和糖链组成，而多级质谱对化合物浓度要求较高，限制了其应用。

发明内容

针对上述现有技术中存在的问题，本发明的一个目的是提供一种三萜皂苷质谱结构解析方法。

为了解决以上技术问题，本发明的技术方案为：

一种三萜皂苷质谱结构解析方法，具体步骤为：将样品先经过液相色谱分离，将分离后的样品进行不同碰撞能下的正离子模式下的二级质谱分析，然后进行不同碰撞能下的负离子模式下的二级质谱分析，利用正离子和负离子模式下不同碰撞能诱导的二级质谱子离子碎片特征进行三萜皂苷化合物的糖链组成和结合位点的结构解析。

通过正负离子模式下的质谱特征，结合碰撞能诱导的二级质谱裂解特征，对糖基的结构和结合位点进行准确的定性。现有技术中，单一碰撞能量、单一离子化模式的二级质谱分析手段不能准确鉴别其结合位点和糖链组成，而多级质谱对化合物浓度要求较高，均不能对低浓度的三萜皂苷进行准确的定性分析。本发明中正离子模式和负离子模式的联用，分别对结合位点和糖链的组成进行准确的结构解析。本发明中，通过正离子模式下子离子的能量分辨曲线确定糖链的结合位点。通过负离子模式下子离子的能量分辨曲线确定糖链内的糖基的组成。

正离子模式下的碰撞能范围为0-100eV，不包括0eV，间隔为5-10eV；

负离子模式下的碰撞能范围为0-100eV，不包括0eV，间隔为5-10eV。

在一些实施例中，正离子模式下碰撞能选择点的个数可以为4-7个；在又一些实施例中，4个碰撞能，40eV、50eV、60eV、70eV；在又一些实施例中，5个碰撞能，分别为45eV、55eV、65eV、75eV、85eV；在又一些实施例中，6个碰撞能，分别为40eV、50eV、60eV、70eV、80eV、90eV；在又一些实施例中，7个碰撞能，分别为40eV、45eV、50eV、55eV、60eV、65eV、70eV。