[发明专利]一种基于蚕蛹混合制剂的制作和功能的研究方法

权利要求书

1.一种基于蚕蛹混合制剂的制作和功能的研究方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1：蚕蛹蛋白粉的制备方法：将鲜蚕蛹用匀浆器匀浆备用，所得匀浆液用五层医用纱布过滤以除去蚕蛹壳等残渣，用PBS(15mmol/l NaCO3，35mmol/l NaHCO3,pH 9.6)缓冲液将滤过液稀释一倍，离心后用医用注射器将油脂层下的清液吸取出来，提取蛋白质，再用稀硫酸调节PH值，将PH值调节至4.0，沉淀后低速离心分离蚕蛹粗蛋白，氧化剂脱色用纯净水反复洗涤并低速离心，最后进行喷雾干燥获得蚕蛹蛋白粉；

S2：蚕蛹油的制备方法：将一部分蚕蛹匀浆装入多功能提取罐装料桶中，加石油醚浸提，浓缩后加入4％的氢氧化钠-95％乙醇溶液皂化，盐酸酸化后再用石油醚萃取制得蚕蛹油；

S3：混合：将S1中制备的蚕蛹蛋白粉和S2中制备的蚕蛹油按照重量以2:8的比例进行混合；

S4：用S3中蚕蛹蛋白和蚕蛹油的混合制剂饲喂阿尔茨海默病模型小鼠(B6C3-Tg)，测试小鼠的认知和记忆能力：将5周龄的阿尔茨海默病小鼠分成实验组和对照组(每组八只，雌雄各半)，实验组每只小鼠每周饲喂4g全蚕蛹蛋白粉和蚕蛹油的混合物；对照组不服用任何蚕蛹粉，每日只饲喂鼠粮，阿尔茨海默病模型小鼠从5周龄开始饲喂，直至13月龄，应用水迷宫测试学习和记忆的获取能力，然后分别进行定位航行试验和空间搜索试验。

2.根据权利要求1所述的一种基于蚕蛹混合制剂的制作和功能的研究方法，其特征在于：所述定位航行实验：使小鼠接触平台，停留2秒，分析软件认为小鼠找到了平台，然后将小鼠移动至水迷宫入口处，直至小鼠找到平台，随即停止跟踪并记录下游泳轨迹和找到平台所需的时间(即潜伏期)等指标，小鼠寻找平台时间设置为90秒，小鼠未及时找到平台，将小鼠放置平台30秒，使其学习记忆，若小鼠顺利找到平台，也将其放置平台30秒。

3.根据权利要求1所述的一种基于蚕蛹混合制剂的制作和功能的研究方法，其特征在于：所述空间搜索试验：在第6天撤除平台，在水池的池壁上设置四个图形标识，依次将小鼠轻轻从池壁的四个图形标识处放入水池，跟踪90秒内小鼠在水迷宫中的运动轨迹，从而分析小鼠平台区的穿越次数，在各象限的运动情况。

4.根据权利要求1所述的一种基于蚕蛹混合制剂的制作和功能的研究方法，其特征在于：所述S1中的离心温度为4℃，离心转速为12000rpm，离心时间为30min。

5.根据权利要求1所述的一种基于蚕蛹混合制剂的制作和功能的研究方法，其特征在于：所述S1中蛋白质的提取利用8倍1.0％NaOH在80℃下进行提取。

6.根据权利要求1所述的一种基于蚕蛹混合制剂的制作和功能的研究方法，其特征在于：所述定位航行实验用于测量动物在水迷宫中的学习和记忆能力，所述定位航行实验总时间为五天，所述空间搜索实验用于测量动物对平台空间位置准确记忆，即记忆保持能力。

7.根据权利要求2所述的一种基于蚕蛹混合制剂的制作和功能的研究方法，其特征在于：所述定位航行实验中平台的位置保持不变。

8.根据权利要求1所述的一种基于蚕蛹混合制剂的制作和功能的研究方法，其特征在于：观察和记录小鼠在所述定位航行实验和所述空间搜索实验中，寻找并爬上平台的路线图及所需时间，即记录其潜伏期和游泳速度，主要分析指标有总路程(单位时间内运动距离)，潜伏期(找到平台的时间间隔)，游泳速度(总路程/运动总时间)等，采用SPSS16.0，进行方差分析，组间采用多重比较。