[发明专利]花生油中黄曲霉毒素的前处理方法及检测方法

说明书

本发明公开了一种花生油中黄曲霉毒素的前处理方法及检测方法，前处理方法，包括如下步骤：称取待测花生油样品，向花生油样品中加入甲醇、丙酮和甲酸的混合水溶液，甲醇、丙酮、甲酸和水的摩尔比为3‑5:8‑10:0.1‑0.3:10‑15，花生油样品与混合水溶液的体积比为1:2‑4；搅拌混合设定时间后，油水分离，向水相中加入水稀释，得到稀释液；向稀释液中加入适量氢氧化钠，调节溶液的pH值为中性，向其中加入固相萃取剂进行搅拌萃取；固液分离，对固相萃取剂进行洗脱附，过滤后，得到待检测的样品溶液；其中，所述固相萃取剂包括活性炭颗粒和包覆于活性炭颗粒表面的包覆层，包覆层中包括有机酸、Cu²⁺或Fe³⁺，有机酸为蓖麻油酸、棕榈油酸或正葵酸。

技术领域

本发明属于花生油检测领域，具体涉及一种花生油中黄曲霉毒素的前处理方法及检测方法。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

黄曲霉毒素是黄曲霉、寄生曲霉在生长过程中产生、分泌的次级代谢产物，其具有耐热性，一般烹调加工温度不能将其破坏，裂解温度为280℃。黄曲霉毒素是一种剧毒物质，毒性比KCN还大，仅次于肉毒霉素，是目前已知霉菌中毒性最强的，主要引起急性肝炎、出血性坏死、肝细胞脂肪变性和胆管增生等。长期摄入小剂量的黄曲霉毒素则造成慢性中毒，其主要变化特征为肝脏出现慢性损伤，如肝实质细胞变性、肝硬化等。此外，黄曲霉毒素是目前所知致癌性最强的化学物质，可诱发多种癌，如肝癌、胃癌、肾癌、泪腺癌、直肠癌、乳腺癌，卵巢及小肠等部位的肿瘤，还可以出现畸胎。

黄曲霉毒素存在于土壤、动植物、各种坚果、特别是花生和核桃中，当粮食未能及时晒干及储藏不当时，往往容易被黄曲霉或寄生曲霉污染而产生此类毒素。

随着国际上和我国黄曲霉毒素污染事件的频频发生，各国在食品领域的监控越来越严格。目前，普遍采用的检测方法包括酶联免疫吸附法、免疫亲和柱-荧光分光光度计法、免疫亲和柱-高效液相色谱法以及HPLC-MS/MS法等。由于花生油中含有大量的化合物，其中包括棕榈酸、软脂酸、硬脂酸、花生酸、山嵛酸、油酸、二十碳烯酸、二十四烷酸等脂肪酸，还含有甾醇、麦胚粉、磷脂、维生素E、胆碱、己醛、γ-丁内酯、壬醛、苯甲醛、苯甲醇、2-甲氧基-3-异丙基吡嗪、1,2,3-三甲基环戊烷、1-乙基-3-甲基环戊烷、4-乙基-2-甲氧基苯酚、4-甲氧基苯酚、3-(1,1-二甲基乙基)苯酚、2,3,5-三甲基吡嗪、2-甲基-5-丙烯基吡嗪、糠酸甲酯，3-己基呋喃、2,3-二氢苯并呋喃、2-乙酰基-5-甲基呋喃、2,5-二甲基噻唑、2,3-二氢苯并呋喃等物质，其中有很多油溶性物质，这部分油溶性物质会影响黄曲霉毒素的提纯和富集，导致黄曲霉毒素的分离困难和净化效果差，进而影响黄曲霉毒素的检测的准确性。

国家标准GB/T18979-2003采用的食品中黄曲霉毒素测定的样品净化方法是免疫亲和柱净化法，该种方法的实验前处理耗时较长，且需要较高的实验成本。

发明内容

针对上述现有技术中存在的技术问题，本发明的目的是提供一种花生油中黄曲霉毒素的前处理方法及检测方法，采用该种前处理方法可以将花生油中的黄曲霉毒素(B1、B2、C1和G2)进行有效地分离净化，并且可有效地提高检测的灵敏度，以满足花生油中多种黄曲霉毒素的检查。

为了解决以上技术问题，本发明的技术方案为：

一种花生油中黄曲霉毒素的前处理方法，包括如下步骤：

称取待测花生油样品，向花生油样品中加入甲醇、丙酮和甲酸的混合水溶液，甲醇、丙酮、甲酸和水的摩尔比为3-5:8-10:0.1-0.3:10-15，花生油样品与混合水溶液的体积比为1:2-4；

搅拌混合设定时间后，油水分离，向水相中加入水稀释，得到稀释液；