[发明专利]一种纳米荧光探针的制备方法及其在检测BV2细胞活化状态中的应用

说明书

本发明属于荧光纳米材料技术领域，具体提供了一种纳米荧光探针的制备方法，包括如下步骤：将碳源用水完全溶解，向溶液中加入小分子配体进行掺杂；超声溶解，加热即得目标产物。所述的碳源为天然氨基酸中的一种或多种。所述的小分子配体为尿素或氨水。按摩尔比，碳源：小分子配体＝1:1‑5。本发明所制备的纳米荧光探针，是以碳原子为骨架结构，具有荧光性能的类球形的纳米颗粒。该纳米荧光探针不仅可以鉴别不同活化状态的BV2细胞，而且还具有生物相容性好、安全无毒、作用效果稳定等特点。它主要特异性识别BV2细胞膜蛋白及细胞因子；其制备方法工艺简单、易于操作，制备成本低，易于推广。

技术领域

本发明属荧光纳米材料技术领域，具体涉及一种纳米荧光探针的制备方法及其在检测BV2细胞活化状态中的应用。

背景技术

小胶质细胞(BV2)参与一系列神经退行性疾病的发生，其活化和神经炎症为神经病理学的主要特征。它诱导中枢神经系统损伤和疾病的内源性免疫反应，从而发挥神经保护或神经毒性作用。任何神经系统紊乱，通常可导致炎症和小胶质细胞的激活，同时胶质细胞的数量增加，表型发生改变，这种现象被称为“反应性胶质增生”。在急性神经退行性疾病(中风、脑缺氧、脑外伤)中，小胶质细胞表型发生改变并释放炎症介质，释放的炎症介质主要为细胞因子和趋化因子。这些急性炎症反应对神经细胞的存活通常是有益的，可使脑内的继发性损伤减轻，使受损的组织得到修复。小胶质细胞介导的慢性炎症参与多种慢性神经变性性疾病的病理过程，包括：阿尔茨海默症、帕金森病、肌萎缩侧索硬化症等。慢性炎症过程中，小胶质细胞被长时程激活，随后持续释放一系列炎症介质，导致氧化应激反应。通常认为，小胶质细胞介导的慢性炎症反应对机体是有害的，可造成神经组织损伤。

在现代生物医学中，研究发现BV2细胞有关的中枢神经炎症对大脑皮层、海马区域均有损伤,并在行为上表现为明显的短暂学习记忆能力下降等行为。这种应激反应在免疫应答研究中常被用来模拟单种或多种克隆免疫剂激发刺激，从而鉴别机体免疫激发状态。

此外，在BV2细胞存在的情况下，神经刺激剂对多巴胺神经元有毒性作用。所以探究诱导BV2细胞活化的状态及程度有着重要的意义，对小胶质细胞的活化状态进行区分以及实时监测小胶质细胞的状态都有着及其重要的意义。

发明内容

本发明的目的是针对现有的荧光探针的存在的不足进行了创新，将荧光探针迅速高效的与BV2细胞进行结合，根据目标结合位点的数量不同产生了不同的荧光信号，在酶标仪和荧光分光光度计上得以很好的区分。

本发明采用的技术方案为：一种纳米荧光探针的制备方法，包括如下步骤：

1)将碳源用水完全溶解，向溶液中加入小分子配体进行掺杂；

2)超声溶解，在180-220℃下加热即得目标产物。

优选地，上述的一种纳米荧光探针的制备方法，所述的碳源为天然氨基酸中的一种或多种。

优选地，上述的一种纳米荧光探针的制备方法，所述的小分子配体为氨类小分子。

优选地，上述的一种纳米荧光探针的制备方法，所述的小分子配体为尿素或氨水。

优选地，上述的一种纳米荧光探针的制备方法，按摩尔比，碳源：小分子配体＝1:1-5。

上述的一种纳米荧光探针的制备方法所制备的纳米荧光探针在检测BV2细胞活化状态中的应用。

优选地，上述的应用，

1)纳米荧光探针经过滤，透析，冻干后分散于PBS缓冲溶液中，得到荧光纳米探针溶液，置于20℃以下常温避光保存；

2)将纳米荧光探针溶液加入到含有BV2细胞的96孔板中，孵化5min,检测荧光强度。

优选地，上述的应用，步骤1)中所述的荧光探针溶液的浓度为5-20mg/L。