[发明专利]一种动脉粥样硬化易损斑块小鼠模型的构建方法

说明书

本发明公开了一种动脉粥样硬化易损斑块小鼠模型的构建方法。该方法是通过杂交的方法获得具有原纤蛋白1(Fibrillin‑1，Fbn1)基因杂合点突变的低密度脂蛋白受体基因(LDLR)敲除小鼠。本发明首次将Fbn1^C1039G+/‑点突变引入LDLR^‑/‑小鼠基因组，结合了两种基因型的特点，方法简单易行，能形成具有大脂质核心、大量的炎症细胞、典型薄纤维帽、丰富的新生血管和斑块内出血、血管外向重构等特点的易损斑块，且能模型上观察到类似于人的斑块破裂等导致急性心脑血管事件的发生。其成模率高，可重复性好，为药物研究、器械耗材改进提供良好的动物基础，为探索动脉粥样硬化机制提供了良好平台。

技术领域

本发明涉及一种动脉模型的构建方法，特别涉及一种动脉粥样硬化易损斑块小鼠模型的构建方法。本发明属于生物技术领域。

背景技术

目前，我国心血管病死亡占城乡居民总死亡原因的首位，心血管病的疾病负担日渐加重，已成为重大的公共卫生问题。冠心病是心血管疾病中最主要的疾病，动脉粥样硬化(Atherosclerosis，AS)是冠心病的最主要的病理过程，关于动脉粥样硬化的研究，成为近年心血管领域的研究热点。易损斑块破裂是不良心血管事件发生的首要原因，据报道，有3/4的急性心梗的发生是源于斑块破裂，但由于动物基因组和人类基因组的差异，以及斑块形成的病理生理过程不同，使目前动物模型易损斑块与人类易损斑块还有很大差异，因此，建立和人类动脉粥样硬化斑块相似的动物模型成为目前亟待解决的难题。

关于动脉粥样硬化的研究主要存在以下几种方式：1、高脂饮食诱导：由于动物与人基因组的不同，单纯饮食诱导动脉粥样的方式下，鼠、兔等动物不易产生动脉粥样硬化，仅猴子和猪等与人类基因组高度同源的动物能产生类似于人的斑块，但这类动物存在花费贵、喂养时间长、操作难度大等问题，成为研究的主要限制。2、血管损伤：通过损伤血管内皮的方式可缩短斑块形成时间，但其可重复性差，且无法模拟人类斑块形成的整个病理生理过程。3、基因敲除技术：目前基因敲除技术广泛用于动脉粥样硬化的研究中，小鼠由于繁殖速度快，喂养时间短，易操作等优势成为基因敲除技术应用最多的动物。目前广泛用于动脉粥样硬化的基因敲除鼠包括：ApoE^-/-小鼠和LDLR^-/-小鼠等，正常饮食状态下，ApoE^-/-小鼠也能形成动脉粥样硬化斑块，但其动脉粥样硬化程度轻，而高脂饮食喂养的ApoE^-/-和LDLR^-/-鼠都能形成动脉粥样硬化斑块，但其斑块形成迅速，很难观察到人类易损斑块可见的外向重构。基于上述限制，有研究人员利用基因敲除技术构建了ApoE基因敲除犬(公开号为CN106987604)，该方法优点在于保留疾病原发症状，疾病表型持续时间长，但由于犬喂养时间长，繁殖慢等问题不利于普遍研究。而公开号为CN101480359A的专利申请所提供的利用液氮冻伤血管的方法建立的易损斑块模型，不利于研究易损斑块产生的机制和探索干预办法。

综上所述，目前关于动脉粥样易损斑块的研究中，缺乏一种符合人类易损斑块特点的动物模型和建模方法。因此，建立和人类动脉粥样硬化斑块相似的动物模型成为目前亟待解决的难题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种动脉粥样硬化易损斑块小鼠模型的构建方法。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：

一种动脉粥样硬化易损斑块小鼠模型的构建方法，其是通过杂交的方法获得具有原纤蛋白1(Fibrillin-1，Fbn1)基因杂合点突变的低密度脂蛋白受体基因(LDLR)敲除小鼠。

其中，优选的，所述的原纤蛋白1(Fibrillin-1)基因杂合点突变是指Fbn1^C1039G+/-。

其中，优选的，所述的构建方法包括以下步骤：