[发明专利]一种重组荞麦防御素蛋白及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种重组荞麦防御素蛋白，其特征在于，所述重组荞麦防御素蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。

2.一种DNA片段，其特征在于，所述DNA片段的序列为编码权利要求1所述的重组荞麦防御素蛋白的核苷酸序列。

3.根据权利要求2所述的DNA片段，其特征在于，所述DNA片段的核苷酸序列如SEQ IDNO.3或SEQ ID NO.4所示。

4.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体含有至少一个拷贝的如权利要求2或3所述的DNA片段。

5.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有如权利要求4所述的表达载体。

6.一种如权利要求1所述的重组荞麦防御素蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)通过分析荞麦全基因序列筛选获得荞麦防御素蛋白的编码基因；

2)根据荞麦防御素蛋白编码基因设计引物，以全合成的荞麦防御素蛋白编码基因为模板进行扩增；

3)将步骤2)扩增得到的基因片段克隆到表达载体中，构建重组质粒；

4)将步骤3)中得到的重组质粒转化入大肠杆菌中，得到重组大肠杆菌，然后对重组大肠杆菌诱导表达，分离得到重组荞麦防御素蛋白。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤2)所述引物为SEQ ID NO.5和SEQID NO.6所示的序列。

8.根据权利要求6或7所述的制备方法，其特征在于，步骤3)所述基因片段克隆到载体中连接到BamH I和XhoI克隆位点。

9.如权利要求1所述的重组荞麦防御素蛋白、如权利要求2或3所述的DNA片段、如权利要求4所述的表达载体或如权利要求5所述的宿主细胞在制备抗真菌药物中的应用。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述真菌为黑曲霉、白腐霉或尖孢镰刀菌。