[发明专利]一种同时对蓝靛果中9种花青素进行定性和定量检测的方法

权利要求书

1.一种同时对蓝靛果中9种花青素进行定性和定量检测的方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：

一、提取蓝靛果中花青素，用去离子水溶解，再用滤膜过滤，得到样品溶液；

二、分别配制矢车菊素-3,5-双葡萄糖苷标准品、飞燕草素-3-O-葡萄糖苷标准品、飞燕草素-3-O-芸香糖苷标准品、芍药素-3,5-双葡萄糖苷标准品、矢车菊素-3-O-芸香糖苷标准品、天竺葵素-3-O-葡萄糖苷标准品、芍药素-3-O-葡萄糖苷标准品、芍药素-3-O-芸香糖苷标准品和矢车菊素-3-O-葡萄糖苷标准品的标准溶液；

三、采用高效液相色谱仪对各个标准溶液在相同的条件下进行检测，其中高效液相色谱仪的色谱参数如下：

色谱柱：以十八烷基键合硅胶为填充剂的C18色谱柱；

柱温：30～35℃；

流动相A：质量百分数为2％～4％的甲酸水溶液；流动相B：乙腈；

进样量：10μL；

流动相梯度洗脱程序为：洗脱时间为15～20min，从开始洗脱至洗脱结束这段洗脱时间内，流动相A的体积百分数从89％～91％均匀降低至85％～87％；流动相B的体积百分数9％～11％均匀提高至13％～15％；洗脱过程中的任意时刻流动相A与流动相B的体积百分数之和为100％；

流动相流速为：0.8～1.2mL/min；

二极管阵列检测器的检测波长为：520nm和210～600nm；

分别记录各种标准品的保留时间及浓度和峰面积，并分别绘制各种标准品的浓度与峰面积之间的标准曲线；

四、采用与步骤三的标准品相同的测试条件，测试步骤一制备的样品溶液的各峰的保留时间和峰面积，通过与标准品的保留时间或紫外-可见光谱对照，对各种花青素进行定性分析，根据样品溶液中各峰的峰面积从标准曲线中计算出各种花青素的浓度，从而完成各种花青素的定量分析。

2.根据权利要求1所述的一种同时对蓝靛果中9种花青素进行定性和定量检测的方法，其特征在于步骤一中所述的蓝靛果中花青素的提取方法，按以下步骤进行：

(一)、将蓝靛果研磨成果浆，每1g果浆中加入4mL酸化甲醇溶液，将果浆和酸化甲醇的混合液于室温震荡提取1h，再离心分离，分别留取上清液和沉淀；将沉淀再重复以上步骤进行提取，合并上清液，再用旋转蒸发仪，在40℃、0.1MPa的条件下旋蒸60min，得到提取液；

(二)、分别用10mL的质量百分数≥99.5％的甲醇溶液和10mL体积分数为0.01％的盐酸水溶液注入C-18Sep-Pak cartridge固相萃取柱进行淋洗活化，然后将步骤(一)得到的提取液注入固相萃取柱中，使花青素吸附到固相萃取柱上，再用体积分数为0.01％的盐酸水溶液淋洗以去除其中的糖、酸和其他水溶性化合物；将固相萃取柱干燥，再用体积分数0.01％的盐酸甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，将洗脱液用旋转蒸发仪在温度为40℃的条件下水浴蒸干，然后用酸化去离子水复溶，进行冷冻干燥处理，得到蓝靛果花青素提取物冻干粉。

3.根据权利要求2所述的一种同时对蓝靛果中9种花青素进行定性和定量检测的方法，其特征在于步骤(一)中所述的酸化甲醇溶液是在质量百分浓度≥99.5％的甲醇溶液中加入10g 2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚和30mL的质量百分浓度≥99.5％的甲酸，再用质量百分浓度≥99.5％的甲醇溶液定容至1L得到的。

4.根据权利要求2或3所述的一种同时对蓝靛果中9种花青素进行定性和定量检测的方法，其特征在于步骤(二)中所述的体积分数为0.01％的盐酸水溶液是将0.01mL质量分数为36.5～37％的盐酸加入到100mL去离子水中得到的。

5.根据权利要求2或3所述的一种同时对蓝靛果中9种花青素进行定性和定量检测的方法，其特征在于步骤(二)中所述的体积分数为0.01％的盐酸甲醇溶液是将0.01mL质量分数为36.5～37％的盐酸加入到100mL质量百分数≥99.5％的甲醇溶液中得到的。

6.根据权利要求2或3所述的一种同时对蓝靛果中9种花青素进行定性和定量检测的方法，其特征在于步骤(二)中所述的酸化去离子水是将0.1mL质量百分浓度≥99.5％的甲酸加入到100mL去离子水配制而成的。

7.根据权利要求1或2所述的一种同时对蓝靛果中9种花青素进行定性和定量检测的方法，其特征在于步骤一中所述滤膜的孔径为0.2～0.3μm。