[发明专利]一种24,25-双羟基维生素D免疫检测试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及一种24,25‑双羟基维生素D免疫检测试剂盒及其应用，试剂盒包括：全氟辛酸工作液、生物素工作液、抗体工作液、链霉亲和素包被的磁颗粒试剂、24,25‑(OH)2‑VitD校准品溶液及化学发光底物液，所述抗体工作液包含化学发光标记物标记的抗24,25‑(OH)2‑VitD免疫单抗、未标记的抗25‑OH‑VitD免疫单抗、未标记的抗1,25‑(OH)2‑VitD免疫单抗、未标记的抗3‑epi‑25OH‑VitD免疫单抗。本发明还采用上述试剂盒对24,25‑(OH)2‑VitD进行化学发光免疫检测，结果准确。

技术领域

本发明涉及一种24,25-双羟基维生素D免疫检测试剂盒及其应用，属于体外检测技术领域。

背景技术

维生素D在人体中主要以胆钙化醇(D3)和麦角钙化醇(D2)两种形式存在，其中，胆钙化醇(D3)来源于阳光和肉制品，麦角钙化醇(D2)来源于膳食植物源。维生素D内分泌系统在人体中起着重要的生物学功能，维生素D经血液循环进入肝脏，在25-羟化酶CYP2R1的作用下转化为25-羟基维生素D(25-OH-VitD，包括25-OH-VitD2和25-OH-VitD3)，继而在肾脏中被24-羟化酶CYP24A1催化生成24,25-双羟基维生素D(24,25-(OH)2-VitD)，25-OH-VitD还可在体内代谢为具有生物学活性的1,25-(OH)2-VitD及3-epi-25OH-VitD。

研究表明，24,25-(OH)2-VitD与25-OH-VitD呈依赖关系，25-OH-VitD与24,25-(OH)2-VitD的浓度比值在血清25-OH-VitD浓度低于20ng/ml时显著增加，而在血清25-OH-VitD浓度高时此比值下降，这可能是由于血液循环中25-OH-VitD下降导致CYP24A1下调，以促进分解代谢产物1,25-(OH)2-VitD的产生；而在25-OH-VitD高浓度个体中，则倾向于产生24,25-(OH)2-VitD以降低1,25-(OH)2-VitD的产量，起到预防毒性的作用。因此，血清24,25-(OH)2-VitD浓度的测定有助于识别CYP24A1功能缺失突变的患者，且血清中25-OH-VitD与24,25-(OH)2-VitD浓度的比值可以作为维生素D分解代谢状态的指标，尤其对于肾钙化或肾结石患者，如果检测到25-OH-VitD与24,25-(OH)2-VitD的浓度比值升高，说明要限制或避免补充维生素D，以防止高钙血症和进一步的结石形成。

目前，对于25-OH-VitD的检测已经应用得比较成熟，常使用的检测方法有竞争法或蛋白结合免疫法及色谱法，其中，液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)法为检测的标准方法，然而此方法专业水平要求极高、费时费力，而免疫方法相对简单、通量高，目前国内外各大体外诊断试剂厂家提供各种25-OH-VitD免疫检测试剂，包括从样本准备阶段(如从VDBP中完全连续地释放25-OH-VitD)、结合系统(单抗、多抗还是VDBP)、检测系统(酶、荧光物质、发光物质等)、信号系统(如光吸收、化学发光、放射标记等)等各个阶段所用到的各种试剂，目前国际标准品已建立起来，为消除方法间差异打下基础。然而，对于24,25-(OH)2-VitD的检测，国内外仅有使用LC-MS/MS法测定24,25-(OH)2-VitD的报道，LC-MS/MS操作复杂费时而且需要高端精密的仪器，但是目前尚无免疫学方法可以准确检测24,25-(OH)2-VitD。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：为解决现有技术中尚无免疫学方法可以准确检测24,25-(OH)2-VitD的技术问题，提供一种24,25-双羟基维生素D免疫检测试剂盒及其应用。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：