[发明专利]一种24,25-双羟基维生素D免疫检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种24,25-双羟基维生素D免疫检测试剂盒，其特征在于，包括：全氟辛酸工作液、生物素工作液、抗体工作液、链霉亲和素包被的磁颗粒试剂、24,25-(OH)2-VitD校准品溶液及化学发光底物液，所述抗体工作液包含化学发光标记物标记的抗24,25-(OH)2-VitD免疫单抗、未标记的抗25-OH-VitD免疫单抗、未标记的抗1,25-(OH)2-VitD免疫单抗和未标记的抗3-epi-25OH-VitD免疫单抗；

所述全氟辛酸工作液中含有5-15体积％的乙二醇，所述全氟辛酸工作液中全氟辛酸的浓度为100ng/mL；

所述抗体工作液中含有蛋白、多糖及多元醇，所述蛋白为白蛋白和/或酪蛋白，浓度为0.5-2mg/mL；所述多糖为果糖和/或蔗糖，浓度为3-5mg/mL；所述多元醇为丙三醇和/或乙二醇，浓度为3-5mg/mL。

2.根据权利要求1所述的24,25-双羟基维生素D免疫检测试剂盒，其特征在于，所述抗24,25-(OH)2-VitD免疫单抗、抗25-OH-VitD免疫单抗、抗1,25-(OH)2-VitD免疫单抗、抗3-epi-25OH-VitD免疫单抗均为绵羊单抗。

3.根据权利要求1或2所述的24,25-双羟基维生素D免疫检测试剂盒，其特征在于，所述抗体工作液中含有异噬性抗体阻断剂HBR。

4.根据权利要求1或2所述的24,25-双羟基维生素D免疫检测试剂盒，其特征在于，所述抗体工作液由PBS或CBS缓冲液配制而成。

5.根据权利要求1或2所述的24,25-双羟基维生素D免疫检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光标记物标记的抗24,25-(OH)2-VitD免疫单抗的制备方法为：将抗24,25-(OH)2-VitD免疫单抗与化学发光标记物在PBS或CBS缓冲液中按1:10～20的摩尔比反应0.5-1.5小时，透析去除未交联的小分子，得到化学发光标记物标记的抗24,25-(OH)2-VitD免疫单抗。

6.根据权利要求1或2所述的24,25-双羟基维生素D免疫检测试剂盒，其特征在于，全氟辛酸工作液由PBS或CBS缓冲液配制而成。

7.根据权利要求1或2所述的24,25-双羟基维生素D免疫检测试剂盒，其特征在于，所述24,25-(OH)2-VitD校准品溶液由去类固醇激素血清配制而成。

8.根据权利要求1或2所述的24,25-双羟基维生素D免疫检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光标记物选自鲁米诺或其衍生物、异鲁米诺或其衍生物、吖啶酯或吖啶磺酰胺。

9.根据权利要求1或2所述的24,25-双羟基维生素D免疫检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光底物液包括化学发光激发液1和化学发光激发液2，所述化学发光激发液1含无机酸和过氧化物，所述化学发光激发液2含氢氧化物。

10.一种权利要求1-9任一项所述的24,25-双羟基维生素D免疫检测试剂盒的应用，其特征在于，按照以下步骤使用：

将待测样本与全氟辛酸工作液加热反应，之后加入生物素工作液和抗体工作液加热孵育，再加入链霉亲和素包被的磁颗粒试剂加热孵育，形成磁性复合物悬浮液；

将磁性复合物悬浮液置于磁场内，洗涤所述磁性复合物；

向洗涤后的磁性复合物中注入化学发光底物液，检测其化学发光光子强度。