[发明专利]一种利用α-溶血素纳米孔检测铜离子的方法

权利要求书

1.一种利用α-溶血素纳米孔检测铜离子的方法，其特征在于，包括：

步骤1：α-溶血素纳米孔的组装；

步骤2：利用上述α-溶血素纳米孔检测不同浓度铜离子样品，建立信号频率与铜离子浓度的工作曲线；

步骤3：检测未知铜离子浓度样品中铜离子的信号频率，利用上述工作曲线计算铜离子浓度。

2.根据权利要求1所述的利用α-溶血素纳米孔检测铜离子的方法，其特征在于，所述步骤1具体为：

用貂毛笔在trans检测池的小孔内外两侧均匀涂抹磷脂溶液；将cis检测池和trans检测池组装后分别加入1M KCl电解质溶液，将一对Ag/AgCl电极浸入电解质溶液中，通过电流放大器探头向磷脂双分子层膜两端施加电压，使用提拉法在trans池的小孔处形成磷脂双分子层膜；在cis检测池中加入α-溶血素，当α-溶血素在磷脂双分子层膜上自组装形成一个稳定的纳米通道时，离子流将量子化阶跃；在+150mV电压条件下，单个纳米孔的稳定开孔电流为150±10pA。

3.根据权利要求1所述的利用α-溶血素纳米孔检测铜离子的方法，其特征在于，所述步骤2具体为：

21)将不同浓度的铜离子溶液分别与DNA探针、还原剂和铜离子螯合剂混合均匀，在30℃下孵育2h；

22)将上述步骤21)的样品注入cis检测池，在外加电场+150mV的驱动下，待测物逐一通过α-溶血素纳米孔，产生特征性的阻断电流信号；

23)实时观测并记录阻断电流信号，建立铜离子浓度和阻断电流信号频率之间的线性关系。

4.根据权利要求3所述的利用α-溶血素纳米孔检测铜离子的方法，其特征在于，所述步骤21)中，铜离子浓度分别为5μM、1μM、0.1μM、10^-2μM、10^-3μM、10^-4μM。

5.根据权利要求4所述的利用α-溶血素纳米孔检测铜离子的方法，其特征在于，所述DNA探针为C₁₀(5’-CCCCCC(azide)CCCC-3’)和C₆(5’-CCCCCC(alkyne)-3’)，所述C₁₀与C₆的浓度为100μM。

6.根据权利要求5所述的利用α-溶血素纳米孔检测铜离子的方法，其特征在于，所述还原剂为抗坏血酸；所述铜离子螯合剂为三羟丙基三唑甲基胺。

7.根据权利要求6所述的利用α-溶血素纳米孔检测铜离子的方法，其特征在于，所述C₁₀、C₆、三羟丙基三唑甲基胺和抗坏血酸混合后，使用PBS溶液调整液体体积，使得C₁₀、C₆、三羟丙基三唑甲基胺和抗坏血酸的最终浓度分别为10μM、10μM、1mM和1mM。