[发明专利]环匹阿尼酸免疫层析时间分辨荧光试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了环匹阿尼酸免疫层析时间分辨荧光试剂盒及其应用。它包括荧光试纸条和含有铕标记的抗环匹阿尼酸单克隆抗体冻干品的样品反应瓶，其中所述荧光试纸条包括底板，底板的粘性面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接，检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上自上而下设置横向质控线和检测线，质控线包被有兔抗鼠多克隆抗体，检测线上包被环匹阿尼酸‑卵清蛋白偶联物；所述抗环匹阿尼酸单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO.C201871的杂交瘤细胞株YTT‑2分泌产生。其可用于环匹阿尼酸的检测，具有操作简单、快速、灵敏度高的特点。

技术领域

本发明涉及环匹阿尼酸免疫层析时间分辨荧光试剂盒及其应用。

背景技术

环匹阿尼酸首先在圆弧青霉菌中发现并分离，主要由青霉菌属和曲霉菌属真菌产生一种次级代谢产物。环匹阿尼酸性质稳定，一般的储存条件和加工过程不能破坏，即使经过巴氏杀菌，也几乎完全不能被破坏。环匹阿尼酸可污染花生、玉米、饲料等多种农产品，人和动物摄入后，会引起心肌细胞变性、重量减轻和共济失调等症状，对人们的饮食安全造成重大威胁。

目前，现有环匹阿尼酸检测方法包括薄层层析法、高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用法等。其中薄层层析法不需要特殊的仪器设备，但试剂用量大、操作繁琐、不能准确定量，且对实验人员和周围环境污染危害较大。高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用法等精密仪器分析法灵敏度高，准确性好，但又有仪器昂贵，样品前处理过程繁琐，耗时长，对实验环境要求高等不足，难以实现快速检测。免疫分析技术克服了前两者的缺点，具有特异性强、灵敏度高、样品前处理简单、对环境的污染危害小、适于现场批量检测等优点，已应用于食品、医疗等多个领域。

发明内容

本发明所要解决的问题是提供一种环匹阿尼酸免疫层析时间分辨荧光试剂盒及其应用。该免疫层析时间分辨荧光试剂盒可用于环匹阿尼酸的检测，具有操作简单、快速、灵敏度高的特点。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：

环匹阿尼酸的免疫层析时间分辨荧光试剂盒，它包括荧光试纸条和含有铕标记的抗环匹阿尼酸单克隆抗体冻干品的样品反应瓶，其中所述荧光试纸条包括底板，底板的粘性面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接，检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上自上而下设置横向质控线和检测线，质控线包被有兔抗鼠多克隆抗体，检测线上包被环匹阿尼酸-卵清蛋白偶联物；所述抗环匹阿尼酸单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO.C201871的杂交瘤细胞株YTT-2分泌产生，所述的杂交瘤细胞株YTT-2于2018年3月23日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址是，中国，武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCC NO.C201871。

按上述方案，所述铕标记的抗环匹阿尼酸单克隆抗体是按照以下方法制备得到的：将抗环匹阿尼酸单克隆抗体和活化后的铕标记试剂在硼酸缓冲液中混合、振荡反应，然后经离心、复溶、封闭步骤得到目标产物铕标记的抗环匹阿尼酸单克隆抗体；1mL活化后的铕标记试剂可偶联抗环匹阿尼酸单克隆抗体：40μg～90μg。

按上述方案，所述的活化方法为取铕标记试剂，用pH 8.2 0.2M的硼酸缓冲液超声分散，然后缓慢加入碳二亚胺溶液，室温振荡活化，离心去上清，用pH 8.2 0.2M的硼酸缓冲液复溶，备用，所述的活化时间为15～30min。

上述配制好的铕标记的抗环匹阿尼酸单克隆抗体复溶于含1.5％(m/v)海藻糖、2％(m/v)牛血清白蛋白的0.01mol/L pH 7.4的磷酸缓冲液中备用，使用时，取一定量的铕标记的抗环匹阿尼酸单克隆抗体放入样品反应瓶中，置于冷冻干燥机中冻干，得到铕标记的抗环匹阿尼酸单克隆抗体冻干品，备用。