[发明专利]环匹阿尼酸免疫层析时间分辨荧光试剂盒及其应用

权利要求书

1.环匹阿尼酸免疫层析时间分辨荧光试剂盒，其特征在于：它包括荧光试纸条和含有铕标记的抗环匹阿尼酸单克隆抗体冻干品的样品反应瓶，其中所述荧光试纸条包括底板，底板的粘性面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接，检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上自上而下设置横向质控线和检测线，质控线包被有兔抗鼠多克隆抗体，检测线上包被环匹阿尼酸-卵清蛋白偶联物；所述抗环匹阿尼酸单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO.C201871的杂交瘤细胞株YTT-2分泌产生，所述抗环匹阿尼酸单克隆抗体的重链可变区序列如SEQ ID NO:3所示，轻链可变区序列如SEQ ID NO:4所示。

2.根据权利要求1所述的环匹阿尼酸免疫层析时间分辨荧光试剂盒，其特征在于：所述铕标记的抗环匹阿尼酸单克隆抗体是按照以下方法制备得到的：将抗环匹阿尼酸单克隆抗体和活化后的铕标记试剂在硼酸缓冲液中混合、振荡反应，然后经离心、复溶、封闭步骤得到目标产物铕标记的抗环匹阿尼酸单克隆抗体；1mL活化后的铕标记试剂偶联抗环匹阿尼酸单克隆抗体：40μg～90μg。

3.根据权利要求2所述的环匹阿尼酸免疫层析时间分辨荧光试剂盒，其特征在于：所述的活化方法为取铕标记试剂，用pH 8.2 0.2M的硼酸缓冲液超声分散，然后缓慢加入碳二亚胺溶液，室温振荡活化，离心去上清，用pH 8.2 0.2M的硼酸缓冲液复溶，备用，所述的活化时间为15～30min。

4.根据权利要求1所述的环匹阿尼酸免疫层析时间分辨荧光试剂盒，其特征在于：所述荧光试纸条中的吸水垫长16～18mm，宽3～4mm；检测垫长18～30mm，宽3～4mm；样品垫长10～12mm，宽3～4mm，相邻各垫的交叠长度为1～3mm；所述荧光试纸条中检测垫上的检测线与硝酸纤维素膜上沿的间距为15～20mm，质控线和检测线的间距为5～10mm；所述的样品反应瓶为1-5mL的卡口瓶。

5.根据权利要求1所述的环匹阿尼酸免疫层析时间分辨荧光试剂盒，其特征在于：所述荧光试纸条中检测垫上每厘米检测线所需的环匹阿尼酸-卵清蛋白偶联物CPA-OVA的包被量为100～400ng；每厘米质控线所需的兔抗鼠多克隆抗体的包被量为100～300ng；所述样品反应瓶中铕标记的抗环匹阿尼酸单克隆抗体的含量为100～200ng。

6.根据权利要求1所述的环匹阿尼酸免疫层析时间分辨荧光试剂盒，其特征在于：其还包括样品稀释液和样品稀释液吸管，所述的样品稀释液为体积分数为0.01～0.30％的吐温-20水溶液。

7.根据权利要求1所述的环匹阿尼酸免疫层析时间分辨荧光试剂盒，其特征在于：所述的荧光试纸条的制备方法如下：

(1)将吸水纸剪裁得吸水垫；

(2)检测垫的制备：

将环匹阿尼酸-卵清蛋白偶联物CPA-OVA用包被缓冲液配制成浓度为0.2～0.5mg/mL的包被液，于距硝酸纤维素膜上沿15～20mm的位置，用线喷方式将其横向包被于硝酸纤维素膜上，得到检测线，每厘米检测线所需环匹阿尼酸-卵清蛋白偶联物的包被量为80～400ng，然后于37～40℃条件下干燥60～120分钟；

将兔抗鼠多克隆抗体用包被缓冲液配成浓度为0.2～0.5mg/mL的包被液，于距检测线5～10mm的位置，用线喷方式将其横向包被于硝酸纤维素膜上，得质控线，每厘米质控线所需的兔抗鼠多克隆抗体的包被量为100～300ng，然后于37～40℃条件下干燥60～120分钟；

(3)样品垫的制备：

将玻璃纤维膜放入封闭液中浸湿，取出，于37～40℃条件下干燥10～16小时，得样品垫，然后置干燥器中室温保存；

(4)荧光试纸条的组装：

在纸板的一面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫、样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接，交叠长度为1～3mm，即得荧光试纸条。