[发明专利]同步检测黄曲霉菌真菌毒素的免疫层析时间分辨荧光试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种同步检测黄曲霉菌真菌毒素的免疫层析时间分辨荧光试剂盒及其应用。它包括荧光试纸条，以及含有铕标记的各单克隆抗体冻干品的样品反应瓶，其中所述的荧光试纸条包括底板，底板的粘性面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接，所述检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上自上而下设置横向质控线和检测线，质控线包被有兔抗鼠多克隆抗体，检测线上分别包被各毒素的蛋白偶联物，所述的抗环匹阿尼酸单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO.C201871的杂交瘤细胞株YTT‑2分泌产生。可用于样品中黄曲霉毒素、杂色曲霉毒素和环匹阿尼酸含量的同步检测，具有操作简单、快速、灵敏度高的特点。

技术领域：

本发明属生物检测领域，具体涉及一种同步检测黄曲霉菌真菌毒素的免疫层析时间分辨荧光试剂盒及其应用。

背景技术

黄曲霉菌一种常见腐生真菌，生长温度范围较宽，易在温湿度较高的环境中生长繁殖，且能在极端环境条件下存活并生长繁殖。黄曲霉菌侵染花生、玉米、坚果等农产品后，能产生多种有毒真菌毒素，引起人和动物的健康问题。

黄曲霉毒素是黄曲霉和寄生曲霉等产生的一组结构类似的次生代谢产物，是一组以双呋喃环和香豆素为基本结构的化合物，广泛存在于粮食谷物和饲料及其加工品中。黄曲霉毒素目前已发现20余种，主要包括黄曲霉毒素B1(AFB1)、B2(AFB2)、G1(AFG1)、G2(AFG2)和M1(AFM1)等。其中AFB1的毒性最强，它的毒性是氰化钾的10倍，砒霜的68倍，世界卫生组织的癌症研究机构将其定Ⅰ类致癌物质。我黄曲霉毒素具有诱导突变、抑制免疫和致癌的作用，主要作用于肝脏，长期食用含有低水平黄曲霉毒素食物的人其肝脏也将受到损害。

环匹阿尼酸主要是由黄曲霉和寄生曲霉分泌产生的次生代谢产物，是一种能引起人畜各种损害的天然有毒化合物。环匹阿尼酸化学性质稳定，一般的储存条件和加工过程不能破坏，即使经过巴氏杀菌，也几乎完全不能被破坏。环匹阿尼酸广泛存在于大米、玉米、花生、饲料等农产品和奶酪等食品中，污染食品及饲料后，会直接或间接进入食物链，威胁人畜的健康和生命安全。因此加强对农产品及食品中环匹阿尼酸的检测、特别是速测，以便及时了解和掌握食品及饲料的卫生信息。

杂色曲霉毒素是由杂色曲霉、黄曲霉、构巢曲霉等真菌产生的次级代谢产物，是黄曲霉毒素生物合成的前体物。杂色曲霉毒素的化学结构与黄曲霉毒素结构相似，都有两个呋喃环。杂色曲毒在自然界中分布广发，易存在于饲草、小麦、花生、玉米等农产品。杂色曲霉毒素毒性仅次于黄曲霉毒素,具有肝毒性,肾毒性,细胞遗传毒性和强致癌性,污染词料以及农产品后,会直接或间接进入人类食物链,从而严重威胁人类健康以及生命安全,其危害程度摄入量成正相关。

目前，真菌毒素的检测方法主要有薄层色谱法、精密仪器分析法和免疫学分析法。薄层色谱法简便快捷，但准确性差，不能准确定量，应用范围狭窄。精密仪器分析法包括高效液相色谱法、液相色谱与质谱及串联质谱联用等方法，其灵敏度高，准确性好，但样品前处理过程繁琐，需要昂贵的仪器设备以及专业的检测技术人员，难以实现快速检测。免疫学分析是基于抗原抗体特异性反应而开发的一种免疫分析方法，具有特异性强、灵敏度高、样品前处理简单、成本低、对实验人员和周围环境的污染危害小、适于现场批量检测等优点而得了快速发展。同时，同一农产品受多种真菌毒素污染的可能性大，因此迫切需要能同步检测多种真菌毒素的检测技术，以实现对粮食及饲料等中真菌毒素混合污染的同步、快速监测。

发明内容

本发明所要解决的问题是提供一种能同步检测黄曲霉菌真菌毒素的免疫层析时间分辨荧光试剂盒及其应用。该免疫层析时间分辨荧光试剂盒可用于样品中黄曲霉毒素、杂色曲霉毒素和环匹阿尼酸含量的同步检测，具有操作简单、快速、灵敏度高的特点。

为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案为：