[发明专利]同步检测黄曲霉菌真菌毒素的免疫层析时间分辨荧光试剂盒及其应用

权利要求书

1.同步检测黄曲霉菌真菌毒素的免疫层析时间分辨荧光试剂盒，其特征在于：包括荧光试纸条，以及含有铕标记的抗黄曲霉毒素单克隆抗体、铕标记的抗杂色曲霉毒素单克隆抗体和铕标记的抗环匹阿尼酸单克隆抗体冻干品的样品反应瓶，其中所述的荧光试纸条包括底板，底板的粘性面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接，所述检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上自上而下设置横向质控线和检测线，质控线包被有兔抗鼠多克隆抗体，所述检测线个数为3条，检测线上分别包被黄曲霉毒素B1-牛血清白蛋白偶联物、杂色曲霉毒素-牛血清白蛋白偶联物和环匹阿尼酸-卵清蛋白的偶联物，所述的抗环匹阿尼酸单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO.C201871的杂交瘤细胞株YTT-2分泌产生，所述抗环匹阿尼酸单克隆抗体的重链可变区序列如SEQ ID NO:3所示，轻链可变区序列如SEQ ID NO:4所示。

2.根据权利要求1所述的同步检测黄曲霉菌真菌毒素的免疫层析时间分辨荧光试剂盒，其特征在于：所述抗黄曲霉毒素单克隆抗体为抗黄曲霉毒素通用单克隆抗体，由保藏编号为CCTCC NO.C201013的杂交瘤细胞株1C11分泌产生，抗杂色曲霉毒素单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO.C2013187的杂交瘤细胞株ST03分泌产生。

3.根据权利要求1所述的同步检测黄曲霉菌真菌毒素的免疫层析时间分辨荧光试剂盒，其特征在于：铕标记的单克隆抗体是按照以下方法制备得到的：

将抗黄曲霉毒素单克隆抗体和活化后的铕标记试剂在硼酸缓冲液中混合、振荡反应，然后经离心、复溶、封闭步骤得到目标产物铕标记的抗黄曲霉毒素单克隆抗体；1mL活化后的铕标记试剂偶联抗黄曲霉毒素单克隆抗体：30μg～80μg；

将抗杂色曲霉毒素单克隆抗体和活化后的铕标记试剂在硼酸缓冲液中混合、振荡反应，然后经离心、复溶、封闭步骤得到目标产物铕标记的抗杂色曲霉毒素单克隆抗体；1mL活化后的铕标记试剂偶联抗杂色曲霉毒素单克隆抗体：30μg～80μg；

将抗环匹阿尼酸单克隆抗体和活化后的铕标记试剂在硼酸缓冲液中混合、振荡反应，然后经离心、复溶、封闭步骤得到目标产物铕标记的抗环匹阿尼酸单克隆抗体；1mL活化后的铕标记试剂偶联抗环匹阿尼酸单克隆抗体40μg～90μg。

4.根据权利要求3所述的同步检测黄曲霉菌真菌毒素的免疫层析时间分辨荧光试剂盒，其特征在于：所述的活化方法为取铕标记试剂用pH 8.2 0.2M的硼酸缓冲液超声分散，然后缓慢加入碳二亚胺溶液，室温振荡活化，离心去上清，用pH 8.2 0.2M的硼酸缓冲液复溶，备用，所述的活化时间为15～30min。

5.根据权利要求1所述的同步检测黄曲霉菌真菌毒素的免疫层析时间分辨荧光试剂盒，其特征在于：所述荧光试纸条中的吸水垫长16～18mm，宽3～4mm；检测垫长18～30mm，宽3～4mm；样品垫长10～12mm，宽3～4mm，相邻各垫的交叠长度为1～3mm；所述检测垫上每相邻两条检测线之间的间距为2-3mm，靠近质控线的检测线与硝酸纤维素膜上沿的间距为15～20mm，质控线和检测线的间距为5～10mm；所述的样品反应瓶为1-5mL的卡口瓶；所述的同步检测黄曲霉菌真菌毒素的免疫层析时间分辨荧光试剂盒，还包括样品稀释液和样品稀释液吸管，所述的样品稀释液为体积分数为0.01～0.30％的吐温-20水溶液。

6.根据权利要求1所述的同步检测黄曲霉菌真菌毒素的免疫层析时间分辨荧光试剂盒，其特征在于：所述荧光试纸条中检测垫上每厘米检测线所需的黄曲霉毒素B1-牛血清白蛋白偶联物AFB1-BSA的包被量为100～300ng；每厘米检测线所需的杂色曲霉毒素-牛血清白蛋白偶联物ST-BSA的包被量为100～400ng；每厘米检测线所需的环匹阿尼酸-卵清蛋白偶联物CPA-OVA的包被量为100～400ng，每厘米质控线所需的兔抗鼠多克隆抗体的包被量为100～300ng。