[发明专利]杂交瘤细胞株YTT-2及其产生的抗环匹阿尼酸单克隆抗体

说明书

本发明涉及杂交瘤细胞株YTT‑2及其产生的抗环匹阿尼酸单克隆抗体。本发明提供的杂交瘤细胞株YTT‑2，保藏编号CCTCC NO:C201871，可用于制备高效价抗环匹阿尼酸单克隆抗体，抗环匹阿尼酸腹水抗体间接非竞争酶联免疫吸附分析法(ELISA)测得效价可达1.2×10⁵。本发明提供的抗环匹阿尼酸单克隆抗体灵敏度高、特异性好，对环匹阿尼酸的50％抑制浓度IC₅₀为0.84ng/mL，对黄曲霉毒素和杂色曲霉毒素的交叉反应率均小于0.1％，可应用于环匹阿尼酸的残留检测。

技术领域

本发明涉及杂交瘤细胞株YTT-2及其产生的抗环匹阿尼酸单克隆抗体。

背景技术

环匹阿尼酸(CPA)是青霉菌属和曲霉菌属真菌产生次级代谢产物，稳定性好，一般的储存条件和加工程序不能破坏环匹阿尼酸，其毒性主要表现为胃肠溃疡、脾脏萎缩、肾病、肝脏和心肌坏死。同时，环匹阿尼酸是肌质网中钙依赖性ATP酶的特异性抑制剂，导致Ca²⁺浓度升高，致使肌肉收缩增加，造成细胞膜通透性增加，神经元骨架破坏，神经细丝分解，神经微观解聚，导致神经元坏死。环匹阿尼酸可污染花生、玉米、棉籽、饲料等农产品，并能通过饲料转移到牛奶和鸡蛋中。环匹阿尼酸可与黄曲霉毒素同时产生，通常适合黄曲霉毒素产生的条件，也适合环匹阿尼酸产生，因此，环匹阿尼酸造成的农产品、食品安全问题会被同时产生的黄曲霉毒素掩盖，目前研究认为“火鸡X病”、“Kodua中毒”是由环匹阿尼酸与黄曲霉毒素共同引起。一些黄曲霉毒素未检出的农产品中可能含有高浓度的环匹阿尼酸，引起人畜的健康危害。因此，需要建立农产品中CPA的快速、可靠的免疫学检测技术。因此探究及农产品、食品中环匹阿尼酸的分析方法具有重要的意义。

目前环匹阿尼酸分析检测方法主要包括薄层色谱法、高效液相色谱法、液质联用等。薄层色谱法由于前处理操作过程中有机溶剂以及毒素会对操作人员产生毒害作用，且测定结果灵敏度和准确度不高。高效液相色谱法、液质联用等仪器分析法是常用的定性定量分析法，这些方法虽然灵敏度高、稳定性强，但需要大量时间进行复杂的前处理，而且需要严格的实验室环境，昂贵的仪器设备以及专业的操作人员，不能满足现场污染检测。免疫分析是基于抗原与抗体的特异性结合反应，通过免疫标记技术，将酶、放射性元素、胶体金等标记物与抗原或抗体结合，用于定性定量检测待检物质，其中抗体是核心试剂，其质量很大程度上决定了免疫分析的灵敏度与特异性，而只有高质量的抗体才能满足免疫分析。目前，国内外有关CPA的检测方法主要为仪器检测，鲜有针环匹阿尼酸免疫学检测技术的报道。因此，抗环匹阿尼酸单克隆抗体的研究获得可为环匹阿尼酸的快速检测开辟新思路，对实现环匹阿尼酸免疫定量检测具有重要意义。

发明内容

本发明所要解决的问题是提供杂交瘤细胞株YTT-2及其产生的抗环匹阿尼酸单克隆抗体。

本发明提供了杂交瘤细胞株YTT-2，该细胞株已于2018年3月23日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址是，中国，武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCCNO.C201871。其具有序列表中SEQ ID NO:1所示的抗环匹阿尼酸单克隆抗体重链可变区编码基因序列和序列表中SEQ ID NO:2所示的抗环匹阿尼酸单克隆抗体轻链可变区编码基因序列。

抗环匹阿尼酸单克隆抗体，它由保藏编号为CCTCC NO.C201871的杂交瘤细胞株YTT-2分泌产生。其重链可变区具有序列表中SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列；轻链可变区具有序列表中SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列。该抗环匹阿尼酸单克隆抗体可以特异性识别环匹阿尼酸，对环匹阿尼酸的50％抑制浓度IC50为0.84ng/mL。

抗环匹阿尼酸单克隆抗体在环匹阿尼酸含量测定中的应用。