[发明专利]一种水体微生物菌种分离与纯化的方法和采样装置

说明书

本发明一种水体微生物菌种分离与纯化的方法和采样装置，包括步骤1，将待分离与纯化的样品和碳酸钙溶液加入海藻酸钠溶液中得到沉淀和悬浊液；步骤2，向失水山梨糖醇脂肪酸酯和液体石蜡组成的油相A中加入悬浊液得到混合体系A；步骤3，向混合体系A中加入6～10ml的冰醋酸，在22～25℃下反应8～12min得到混合体系B，向混合体系B中加入氯化钙溶液，得到微胶囊，用灭菌水清洗微胶囊得到微胶囊菌种库；步骤4，将微胶囊菌种库逐一接种到多孔平板中培养得到单一菌落，其中多孔平板中装有待分离与纯化菌种的BM液体培养基溶液；本发明结合了乳化微球囊法和多孔平板法，可作为环境功能微生物生态种质资源的建库和分离。

技术领域

本发明涉及水体微生物分离培养领域，具体为一种水体微生物菌种分离与纯化的方法和采样装置。

背景技术

微生物菌种的纯化是指将混杂在一起的不同种类微生物分离开来以得到生产和研究所需要的单一菌种的过程，是微生物工业应用和研究的关键技术，广泛地应用于微生物防腐蚀、水污染控制、矿物冶炼、功能菌剂开发等工业领域和实验研究领域。在具体纯化时一般根据需要纯化的菌种调配相应培养基进行单独分离。在微生物菌种的纯化中，现有的方法主要有十倍稀释分离法、平板划线法、平板涂布法、穿刺分离法、单细胞分离法和超微膜分离法等，但是这些方法往往工艺精细、程序繁琐，尤其是要求操作人员具有相当高的操作水平，这样不仅会大大降低微生物纯菌种的纯化效率，而且还会造成部分微生物菌种活性的丧失。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明提供一种水体微生物菌种分离与纯化的方法和采样装置，准确、简便、高效、易操作，能将水体微生物中的菌种进行高通量分离与纯化，得到单一的菌落。

本发明是通过以下技术方案来实现：

一种水体微生物菌种分离与纯化的方法，包括以下步骤，

步骤1，将待分离与纯化的样品和碳酸钙溶液加入海藻酸钠溶液中得到沉淀和悬浊液，其中海藻酸钠溶液中海藻酸钠的质量与碳酸钙溶液中碳酸钙的质量比为(2.5～75)：(0.5～2.5)；

步骤2，向失水山梨糖醇脂肪酸酯和液体石蜡组成的油相A中加入悬浊液得到混合体系A，其中，在组成油相A时，失水山梨糖醇脂肪酸酯的体积是液体石蜡体积的0.1％～0.3％，在加入悬浊液时，悬浊液的体积与油相的体积比为1：(2～4)；

步骤3，向混合体系A中加入6～10ml的冰醋酸，在22～25℃下反应8～12min得到混合体系B，向混合体系B中加入氯化钙溶液，其中每次加入的氯化钙质量为0.004～0.01g，得到3～5mm的微胶囊，用灭菌水清洗3～5mm的微胶囊得到微胶囊菌种库；

步骤4，将微胶囊菌种库逐一接种到多孔平板中培养得到单一菌落，其中多孔平板中装有待分离与纯化菌种的BM液体培养基溶液。

优选的，步骤2向油相A中以300～350r/min的速率边搅拌边加入悬浊液，搅拌4～8min得到混合体系A。

优选的，步骤3中所述多孔平板为96孔板。

优选的，步骤1中所述待分离与纯化的样品通过以下步骤得到，

步骤1a，将聚乙烯醇纤维丝均匀分散到NaOH溶液中，在50～60℃下搅拌8～12h，收集NaOH溶液中的聚乙烯醇纤维丝得到改性后的聚乙烯醇纤维丝；

步骤1b，将改性后的聚乙烯醇纤维丝与待分离与纯化菌种的BM固体培养基溶液均匀混合得到混合体系C，对混合体系C高压蒸汽灭菌得到高压蒸汽灭菌后的培养基溶液；

步骤1c，将高压蒸汽灭菌后的培养基溶液在厌氧工作台中室温冷却，得到凝胶，将凝胶在-80℃下保持15～30min，之后-80℃～0℃梯度升温80～120min，得到含水量为10％～20％的培养基凝胶条，将该培养基凝胶条装入外壁设置有开口的采集装置中，得到含有培养基凝胶条的采集装置；