[发明专利]一种白藜芦醇提取分离纯化工艺

说明书

本申请涉及分离纯化技术领域，具体涉及一种白藜芦醇提取分离纯化工艺，包括如下步骤：S1:植物样品处理；S2:制备β‑葡萄糖苷酶酶液；S3:固定化酶；S4:向植物样品悬浮液中加入固定化β‑葡萄糖苷酶酶液；S5:转化液收集：S6:白藜芦醇的提取纯化。将β‑葡萄糖苷酶通过包埋法固定，固定化酶可重复使用，使酶的使用效率提高、使用成本降低；固定化酶极易与反应体系分离，简化了提纯工艺，而且产品收率高、质量好；在多数情况下，酶经固定化后稳定性得到提高；固定化酶的催化反应过程更易控制。另外，将植物样品制成悬浮液可与固定化酶充分反应，加快反应速度，提高了植物样品的利用率。

技术领域

本发明涉及分离纯化技术领域，更具体地说，它涉及一种白藜芦醇提取分离纯化工艺。

背景技术

白藜芦醇(化学名为芪三酚)是含有芪类结构的非黄酮多酚类化合物，是植物在受到应激时自身合成的一种抗毒素，难溶于水，易溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿等有机溶剂。主要有抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗氧化、抗自由基、保护肝脏、保护心血管和抗心肌缺血等功能，被广泛应用于食品保健品、化妆品及医药领域。

目前白藜芦醇的生产主要是植物提取法。提取白藜芦醇的植物有葡萄、花生、桑葚、虎杖等。然而，植物中的白藜芦醇含量非常低，使得其分离纯化成本偏高。而白藜芦醇类似物白藜芦醇苷在植物中的含量为白藜芦醇的7～12倍，如果将白藜芦醇苷转化为白藜芦醇，白藜芦醇的产率可大大提高。酶法水解白藜芦醇苷转化为白藜芦醇，因条件温和，反应产物较单一，产率高，而被广泛采用。但是传统酶法水解白藜芦醇苷方法中，酶分散在溶液中易失活，不易回收，成本高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种白藜芦醇提取分离纯化工艺，其具有低成本，可反复提取白藜芦醇的。

本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：一种白藜芦醇提取分离纯化工艺，其特征在于：包括如下步骤：

S1:植物样品处理：将植物碾磨粉碎，并加入多倍体积的去离子水制成植物样品悬浮液；

S2:制备β-葡萄糖苷酶酶液：将产β-葡萄糖苷酶的菌种接种于培养基中，在25℃～50℃，摇床转速120～220rpm的条件下，产酶发酵36～72小时，然后将所有发酵物在5000～10000r/min的转速下离心15～40min，收集上清液即获得β-葡萄糖苷酶粗酶液，将β-葡萄糖苷酶粗酶液进一步在4000～12000r/min的转速下离心15min，去除上清液，得到提纯的β-葡萄糖苷酶酶液；

S3:固定化酶：取5mlβ-葡萄糖苷酶酶液，加到3mL质量分数为3.5％的海藻酸钠溶液中，混合均匀，再加入适量戊二醛溶液，在摇床中恒温振荡，用5mL注射器吸取混合液，以10cm左右高度逐滴注入质量分数为2％的CaCl2溶液中，立即形成光滑的凝胶状小球，出凝胶小球，更换CaCl2溶液，置于4℃冰箱中静置硬化2h；再次滤出凝胶小球，用质量分数为0.9％的NaCl溶液洗涤3次再用蒸馏水冲洗2次，得固定化β-葡萄糖苷酶；

S4:向植物样品悬浮液中加入固定化β-葡萄糖苷酶酶液，充分搅拌后于25℃～45℃条件下静置转化反应15～24小时；或充分搅拌后置于25℃～45℃、摇床转速80～180rpm条件下进行转化反应；

S5:转化液收集：将S4转化反应后的所有物料以4000～8000r/min条件离心，收集上清液即得含白藜芦醇的溶液；

S6:白藜芦醇的提取纯化：向步骤S5获得的含白藜芦醇的溶液中加入其1倍体积量的50～95％的乙醇，在50℃～100℃温度下进行加热回流提取，得纯β-葡萄糖苷酶的转化产物-白藜芦醇液。