[发明专利]二茂铁基共价有机框架修饰电极的制备方法及其电化学检测肌钙蛋白的方法

说明书

二茂铁基共价有机框架修饰电极的制备方法及其电化学检测肌钙蛋白的方法，本专利通过利用纳米材料高比表面积、高导电性、好的生物相容性等优点，结合免疫化学、电化学与计算机等技术，在检测限等分析评价指标上取得了很好的效果。在心脏标志物的快速、准确、高效分析及设备微型化发展上显示出了其它方法无可比拟的优势；同时电化学适配体传感器具有检测速度快，灵敏度高，特异性强，简单便携，成本效益相对较低和微型化等特点，在肌钙蛋白检测领域展现出较好的应用前景。

技术领域

本发明涉及电化学传感领域，尤指一种二茂铁基共价有机框架修饰电极的制备方法及其电化学检测肌钙蛋白的方法。

背景技术

肌钙蛋白(Cardiac troponin,cTn)是肌肉组织收缩的调节蛋白，位于收缩蛋白的细肌丝上，在肌肉收缩和舒张过程中起着重要的调节作用。近年大量研究已表明，肌钙蛋白与急性心肌梗死(AMI)的发生密切相关，可作为AMI的特异生物标志物。因此建立快速、准确、灵敏的肌钙蛋白检测技术对AMI的早期预警和治疗具有重要意义。

目前主要的心脏标志物(肌钙蛋白等)检测技术主要包括干化学法、免疫测定(免疫层析试验、斑点金免疫渗滤试验)和生物传感技术等。但是，由于心脏生物标志物在病人，特别是早期心脑血管疾病患者实际血样中含量较低，且实际血液样品成分复杂，使得这些检测方法难以满足标志物高灵敏、高选择性检测的要求，其检测灵敏度较低，选择性差。

发明内容

本发明的目的在于提供一种选择性高、检测灵敏度较高的二茂铁基共价有机框架修饰电极的制备方法。

本发明的另一目的在于提供二茂铁基共价有机框架修饰电极在电化学传感上的应用。

为了达成上述目的，本发明的解决方案为：二茂铁基共价有机框架修饰电极的制备方法，其特征在于：

步骤一：将1～20mmol/L2,3,6,7,10,11-六羟基三亚苯水溶液和1～20mmol/L硼酸二茂铁的水溶液按照体积比1:3混合，15～50℃下恒温反应8～24h，得到的混合液标记为混合液A；

步骤二：COF修饰电极制备：将预处理过的金电极先滴涂3～20μL浓度为1～20mmol/L对巯基苯硼酸乙醇溶液，室温下晾干，重复滴涂、晾干3～6次后，用蒸馏水淋洗；再将电极上滴涂3～20μL混合液A，室温下晾干，重复滴涂、晾干3～6次，蒸馏水淋洗，得到共价有机框架/金电极，记为修饰电极1；

步骤三：然后将修饰电极1滴涂3～20μL浓度为1～20mmol/L的MCH，室温下晾干，重复滴涂3～6次，蒸馏水淋洗，得到修饰电极2；

步骤四：滴涂5～20μL浓度为1～1000nmol/L的Tro4单链探针于修饰电极2上；并在15～50℃恒温反应30～90min，然后，在混合磷酸盐缓冲液中浸泡1～20min，得到二茂铁基共价有机框架修饰电极。

进一步，所述步骤二中所述金电极的预处理工艺为：金电极依次用粒径为1.0μm、0.3μm和0.05μm的铝粉抛光，然后将金电极放置于去离子水、乙醇和水体积比为1:1的乙醇溶液、去离子水中各超声5min，再将金电极浸泡在H₂SO₄:H₂O₂体积比为7:3的溶液中活化20min，活化后将金电极放置在0.5M H₂SO₄溶液中用循环伏安法扫描，扫描区间为-0.2～+1.5V，扫速100mV/s，扫描50圈，最后用大量水冲洗电极至中性，用N₂N2吹干金电极表面。

进一步，所述Tro4单链探针与目标肌钙蛋白特异性结合，其序列为:5’-CGTG CAGTACGC CAAC CTTT CTCA TGCG CTGC CCCT CTTA-3’。