[发明专利]二茂铁基共价有机框架修饰电极的制备方法及其电化学检测肌钙蛋白的方法

权利要求书

1.二茂铁基共价有机框架修饰电极的制备方法，其特征在于：

步骤一：将1～20mmol/L 2,3,6,7,10,11-六羟基三亚苯水溶液和1～20mmol/L硼酸二茂铁的水溶液按照体积比1:3混合，15～50℃下恒温反应8～24h，得到的混合液标记为混合液A；

步骤二：COF修饰电极制备：将预处理过的金电极先滴涂3～20μL浓度为1～20mmol/L对巯基苯硼酸乙醇溶液，室温下晾干，重复滴涂、晾干3～6次后，用蒸馏水淋洗；再将电极上滴涂3～20μL混合液A，室温下晾干，重复滴涂、晾干3～6次，蒸馏水淋洗，得到共价有机框架/金电极，记为修饰电极1；

步骤三：然后将修饰电极1滴涂3～20μL浓度为1～20 mmol/L的MCH，室温下晾干，重复滴涂3～6次，蒸馏水淋洗，得到修饰电极2；

步骤四：滴涂5～20μL浓度为1～1000nmol/L的Tro4单链探针于修饰电极2上，所述Tro4单链探针的探针序列为: 5’-CGTG CAGT ACGC CAAC CTTT CTCA TGCG CTGC CCCT CTTA-3’；并在15～50℃恒温反应30～90min，然后，在混合磷酸盐缓冲液中浸泡1～20min，得到二茂铁基共价有机框架修饰电极。

2.如权利要求1所述的二茂铁基共价有机框架修饰电极的制备方法，其特征在于：步骤二中所述金电极的预处理工艺为：金电极依次用粒径为1.0μm、0.3μm和0.05μm的铝粉抛光，然后将金电极放置于去离子水、乙醇和水体积比为1:1的乙醇溶液、去离子水中各超声5min，再将金电极浸泡在H₂SO₄:H₂O₂体积比为7:3的溶液中活化20min，活化后将金电极放置在0.5M H₂SO₄溶液中用循环伏安法扫描，扫描区间为-0.2～+1.5V，扫速100mV/s，扫描50圈，最后用大量水冲洗电极至中性，用N₂吹干金电极表面。

3.如权利要求1所述的二茂铁基共价有机框架修饰电极的制备方法，其特征在于：所述Tro4单链探针与目标肌钙蛋白特异性结合，其序列为: 5’-CGTG CAGT ACGC CAAC CTTTCTCA TGCG CTGC CCCT CTTA-3’。

4.如权利要求1所述的二茂铁基共价有机框架修饰电极的制备方法，其特征在于：步骤四中修饰电极2滴涂Tro4单链探针后，随后的恒温反应的反应条件为在12μL对巯基苯硼酸、12μL硼酸二茂铁-六羟基三亚苯混合液中富集60min。

5.如权利要求1至4任一项制备方法所得二茂铁基共价有机框架修饰电极的电化学检测肌钙蛋白的方法，其特征在于：

步骤一：将所得二茂铁基共价有机框架修饰电极用超纯水淋洗，在某一浓度肌钙蛋白富集30～90分钟后，在混合磷酸盐缓冲液中测得的差分脉冲曲线；

步骤二：将肌钙蛋白浓度依次递增，得到多个差分脉冲曲线，将多个差分脉冲曲线的峰电流I_p与对应的肌钙蛋白的浓度作图，得出差分脉冲曲线峰电流I_p与肌钙蛋白浓度的线性关系；

步骤三：检测测试样时，测得相同条件下的差分脉冲曲线的峰电流I_p，利用步骤二所得线性关系定量分析测试样中的肌钙蛋白含量。