[发明专利]一种罗非鱼皮大分子胶原的提取前处理方法

说明书

本发明公开了一种罗非鱼皮大分子胶原的提取前处理方法。清除鱼皮的鱼鳞和鱼肉后、洗净沥干，采用0.9‑2mol/L氢氧化钠或1.5‑2mol/L氢氧化钾溶液，于25‑30℃下搅拌提取100‑210min，然后水洗至中性。由本方法所得罗非鱼皮胶原为白色，并表现良好的自聚集性，可形成丝状纤维，在原子力显微镜下可观察到明暗相间的横纹，与鱼皮中天然存在的胶原纤维形态极其相似，在生物医用材料领域具有潜在的应用前景。本发明方法简单易操作，未采用有机溶剂，无毒害作用，符合绿色化学的要求。

技术领域

本发明涉及生物材料领域，具体的说是一种罗非鱼皮大分子胶原的提取前处理方法。

背景技术

胶原是动物组织中含量最多、分布最广的一类结构蛋白，约占总蛋白量的30％。其具有右手三股螺旋结构，决定了它独特的理化性质和生物功能，如组织与架构、支持及保护、强韧性及延展性、促进伤口愈合与组织修复等，因此胶原已成为生物医用材料的主要原料之一，可被应用于组织工程支架材料、止血海绵、药物控缓释系统、基因传递载体、美容外科等领域。

近年来胶原基生物材料的应用领域不断拓展，因此胶原产品需求量日益增加。目前使用的胶原主要来源于猪、牛等陆生哺乳动物，但是近年来由于疯牛病、口蹄疫等人畜交叉流行病的频发以及原料来源有限，此类胶原的应用受到了限制。

在这种情况下，水产胶原由于原料丰富、易于提取、没有传染病危险等优势而受到广泛的关注。罗非鱼是我国最常见的淡水鱼，近年来，其养殖产业发展迅速，出口量增长迅速，产生大量鱼皮、鱼骨、鱼头等废弃物。研究表明鱼皮干物质的70％以上为胶原。充分利用罗非鱼皮胶原不仅可以进一步拓展水产胶原的应用领域，而且可以提高水产品加工企业的经济效益，提高水产品的加工利用水平。

大分子胶原在医用生物材料领域应用非常广泛。传统罗非鱼皮大分子胶原的制备方法是采用10％正丁醇脱脂，0.1mol/L的NaOH溶液除去非胶原成分，然后通过酶法低温提取。然而由于罗非鱼皮表皮含有色素，通过该方法制备的大分子胶原含有一定量的色素，这种胶原应用于医用生物领域有存在排异反应的风险，严重限制了其应用。因此需对罗非鱼皮进行脱色处理，以提高产品的品质。

据报道，国内外有采用双氧水对鱼皮进行脱色处理，但双氧水一方面操作安全性能差，一方面成本高，其脱色处理后的鱼皮色素并未完全脱除，也限制了其在医用生物材料领域的应用。

自聚集性是胶原的重要特性。具有三股螺旋结构的大分子胶原能够自聚集形成纤维，而表现良好的生物相容性和可降解性，并有利于细胞附着、增殖和分化，因此在医用材料和组织工程领域具有广泛的应用。寻找一种既能使鱼皮脱色又能保持胶原三螺旋结构的前处理方法，是本发明的关键。

发明内容

为了解决现有技术中胶原前处理脱色和结构保持之间的问题，本发明目的在于提供一种罗非鱼皮大分子胶原的提取前处理方法，清除鱼皮的鱼鳞和鱼肉后、洗净沥干，采用0.9-2mol/L氢氧化钠或1.5-2mol/L氢氧化钾溶液，于25-30℃下搅拌提取100-210min，然后水洗至中性。

优选的是，氢氧化钠溶液质量是鱼皮质量的30-50倍。

一种罗非鱼皮大分子胶原的提取方法，包括以下步骤：

(1)选取新鲜的罗非鱼皮，清除鱼皮的鱼鳞和鱼肉，用自来水洗净后沥干，剪成2×2cm的块状。

(2)称取一定量的块状鱼皮，加入鱼皮质量30-50倍的0.9-2mol/L氢氧化钠或1.5-2mol/L氢氧化钾溶液，于30℃下搅拌提取30-210min以脱除色素、脂肪及杂蛋白等，然后水洗至中性。

(3)在鱼皮中加入其质量30-50倍的0.5mol/L醋酸溶液，并加入鱼皮质量0.5-1.0％的胃蛋白酶，在4℃下搅拌提取36-48h。

(4)将步骤(3)所得物于10,000r/min离心30min，收集上清液。