[发明专利]一种微藻总核糖核酸样品制备方法

权利要求书

1.一种微藻总核糖核酸样品制备方法，其特征在于：

将新鲜收集或低温保存的微藻细胞按照如下提取流程进行提取操作，获得纯化的微藻总核糖核酸RNA样品，流程包括：

1)将60～300mg新鲜微藻细胞或者冻存的微藻细胞置于-70～-80℃预冷的研钵中，在液氮保护下研磨成粉末状；

2)按照80～120mg微藻细胞/1mL TRIzol比例加入TRIzol(Ambion-Life TechnologiesCo.,Carlsbad,CA,USA)，使所有藻粉浸泡在TRIzol中，然后加入5～10mL液氮使混合物冷冻为固体；

3)在室温下放置至研钵中生物质粉末和TRIzol开始融化，于融化过程中使用研杵研磨混合均匀；

4)当上述混合液完全融化后，使用移液器将混合液转入离心试管中，每个试管中混合液体积为0.75～1mL；

5)在4℃条件下，将上述混合液在10000～12000g离心4～6min；

6)收集上清至新的离心试管中，尽可能避免吸入沉淀；

7)按照上清750μL体积中加入氯仿150～450μL的比例，加入氯仿后，振荡混合15～20s后，室温静置5～8min；

8)在4℃条件下，将上述混合液在10000～12000g离心4～6min；

9)将上清取出转移至新的离心试管中，加入当前上清体积的1/2体积的异丙醇，振荡混合15～20s后，室温静置9～12min；

10)在4℃条件下，将上述混合液在10000～12000g离心8～12min，去除上清；

11)加入体积浓度75％乙醇1～1.2mL，轻轻上下颠倒洗涤离心管管壁，在4℃条件下，10000～12000g离心4～6min后，去除全部液体；

12)室温干燥沉淀3～5min，加入10～100μL水溶解沉淀，即为所提取的总RNA溶液。

2.如权利要求1所述制备方法，其特征在于：

移液器为无RNase酶的移液器；离心试管为无RNase的离心试管；水为无RNase的水。

3.如权利要求1所述制备方法，其特征在于：

第(2)步中，可使用与TRIzol组成相近的含酚均相提取试剂替代TRIzol，如RNAiso试剂或Beyozol试剂。

4.如权利要求1所述制备方法，其特征在于：

第(7)步中，可加入终浓度为0.8～1M的NaCl。

5.如权利要求1所述制备方法，其特征在于：

使用的试剂和耗材均为无RNase的试剂和耗材。

6.如权利要求1所述制备方法，其特征在于：

所述微藻为绿藻门和金藻门的微藻中的一种或二种以上。