[发明专利]通用型CAR-T细胞、其制备及应用

说明书

本发明通过在CAR‑T细胞中表达相关功能蛋白，下调细胞表面HLA‑I类分子，从而制备得到通用型CAR‑T细胞。本发明还涉及这类通用型CAR‑T细胞的应用。

技术领域

本发明涉及通用型CAR-T细胞、其制备及应用。

背景技术

随着肿瘤治疗的发展，嵌合抗原受体T细胞(Chimeric antigen receptor-T，CAR-T)免疫疗法逐渐成为备受关注的治疗手段。CAR-T细胞所表达的CAR一般包含胞外抗原结合域、跨膜域和胞内信号传导域。通常CAR-T细胞是由患者T细胞经CAR基因转导并扩增而来，最后再回输到该患者体内。CAR-T细胞可以有效的识别肿瘤抗原，引起特异性的抗肿瘤免疫应答，而不受主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex，MHC)的限制。目前，美国FDA已经批准了两款自体CAR-T细胞产品上市，分别是诺华的Kymriah和凯特的YesCAR-Ta，用于难治性复发性非霍奇金淋巴瘤和急性淋巴细胞白血病的治疗。大量临床试验证明，CAR-T作为个性化的活细胞药极具抗肿瘤潜力(Maude et al.2018；Park etal.2018；Schuster et al.2017；)。

传统的CAR-T制备及回输策略是采集患者或供者的外周血，进行T细胞分离，通过慢病毒或逆转录病毒等方式将包含CAR结构的质粒或mRNA转染到细胞内，进行扩大培养再回输到患者体内。每位患者的CAR-T需要单独制备，成本较高且不确定因素较多。如分离得到的细胞不足、患者T细胞功能失常、CAR-T细胞制备失败、CAR-T细胞制备中患者疾病进程较快等因素，都可能造成CAR-T治疗失败。因此，需要健康供者T细胞制备通用型CAR-T解决上述困扰。为了有效制备通用型CAR-T，需要解决2个问题：①因为异体T细胞表面的TCR(Tcell receptor，TCR)会识别患者的异体抗原，从而导致同种异体T细胞回输带来的移植物抗宿主反应(graft-versus-host disease，GVHD)；②宿主的免疫系统会识别异体细胞表面的HLA(human leukocyte antigen)，从而导致回输的异体T细胞被快速清除，影响通用型CAR-T疗效。

目前传统制备通用型CAR-T的方式是通过基因编辑的方式敲除同种异体CAR-T细胞表面的TCR以及HLA-I类分子的表达，以减少GVHD和宿主排斥。已报道多种基因敲除编辑技术(zinc-finger nucleases，ZFN；transcription activator-like effectornucleases，TALENs；clustered regularly interspaced short palindromic repeats，CRISPR)在通用型CAR-T方面的应用(Provasi et al.2012；Berdien et al.2014；Ren etal.2017)。基因编辑虽然给细胞疗法带来了很多可能性，但同样也存在很多未知的风险和障碍，例如脱靶导致错误的基因编辑，工艺繁琐等等。而且，虽然通过基因编辑方式敲除异体T细胞表面的HLA-I能解决患者一部分的排斥反应，但完全敲除HLA-I的异体CAR-T细胞易受到患者的NK(natural killer cell)细胞的攻击，同样影响了通用型CAR-T的疗效(Torikai et al.2013)。因此通过基因编辑方式制备通用型CAR-T的开发之路遇到了一定的阻碍，找寻一种新型的工艺简便、实用安全的蛋白翻译水平调控的非基因编辑方式制备通用型CAR-T至关重要。

发明内容

本发明提供一种CAR-T细胞，其含有特异性靶向肿瘤抗原的嵌合抗原受体和能下调细胞表面HLA-I类分子表达的功能蛋白。

在一个或多个实施方案中，该CAR-T细胞细胞表面HLA-I类分子的表达水平为表达相同嵌合抗原受体但未表达所述功能蛋白的对照CAR-T细胞的50％以下。