[发明专利]利用选择性过滤柱对生物样本中RNA进行纯化的方法

说明书

本发明公开了一种利用选择性过滤柱对生物样本中RNA进行纯化的方法，具体如下：将RNA裂解缓冲液处理后的生物样本进行高速离心分层，将上层水相加入选择性过滤柱的内管中，同时将选择性过滤柱在离心机中离心；向选择性过滤柱内管中加入5‑100微升水，震荡30s后，将选择性过滤柱内管内的水溶液转移至无RNA酶的离心管内，此时离心管的溶液即为纯化后的RNA溶液；利用RNA裂解缓冲液将生物样本细胞进行裂解，高速离心分层去除细胞碎片和DNA后，RNA完全有利于上层水相中，再通过选择性过滤柱的底部的超滤膜，再高速离心情况下，超滤膜仅对小分子物质具有透过性，对生物大分子物质RNA无透过性，进而能够实现大分子物质RNA的纯化。

技术领域

本发明属核酸提取技术领域，涉及一种利用选择性过滤柱对生物样本中RNA进行纯化的方法。

背景技术

RNA包括信使RNA(mRNA)、转运RNA(tRNA)、核糖体RNA(rRNA)、microRNA等多种不同类型，每一种不同类型的RNA都在细胞新陈代谢中发挥着重要的作用，此外，还有部分病毒的遗传物质为RNA。RNA是分子生物学、基因工程学、医学、药学、临床检测等多个领域的重点研究对象之一，RNA提取是实验室常规操作技术手段之一。

与DNA相比较，RNA的稳定性比DNA差，且环境中以及细胞内含有丰富的RNA酶，致使RNA降解是RNA提取操作过程中经常遇见的问题，如何抑制RNA酶是成功提取RNA的先决条件之一。裂解液中加入苯酚、氯仿、异硫氰酸胍、巯基乙醇等物质，可以有效地抑制细胞内源的RNA酶对RNA的降解作用。

样本裂解之后，还需要完成RNA的纯化，蛋白质在苯酚等变性剂作用下形成不溶性沉淀，DNA在低pH值以及苯酚等物质作用下，在离心过程中位于中间层，上层水相中仅有RNA一种生物大分子。对上层水相RNA的纯化可以采用异丙醇沉淀法、硅胶膜法、磁珠法、硅珠法等方法，这些商品化试剂盒的缺点是需要反复漂洗无机盐等。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种利用选择性过滤柱对生物样本中RNA进行纯化的方法，利用RNA裂解缓冲液将生物样本细胞进行裂解，高速离心分层去除细胞碎片和DNA后，RNA完全有利于上层水相中，再通过选择性过滤柱的底部的超滤膜，再高速离心情况下，超滤膜仅对小分子物质具有透过性，对生物大分子物质RNA无透过性，进而能够实现大分子物质RNA的纯化，该方法科学合理，实用性强，无需进行反复漂洗无机盐操作，简便易行。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

利用选择性过滤柱对生物样本中RNA进行纯化的方法，具体包括以下步骤：

第一步，将生物样本采用RNA裂解缓冲液处理后，在12000-16000r/min下进行高速离心分层，将上层水相加入选择性过滤柱的内管中，接着将选择性过滤柱放入离心机中，在3000-10000r/min下离心1-10min，将小分子物质过滤除去；

第二步，向选择性过滤柱内加入5-100微升水，震荡30s后，将选择性过滤柱内的水溶液转移至干净的离心管内，此时离心管中的溶液即为纯化浓缩后的溶液；

其中，所述选择性过滤柱包括外管和套设在外管内部的内管，内管的管底开有出液口，出液口处一体连接固定有出液管，同时内管的侧壁内表面位于出液口的上方安装有支撑板，支撑板的表面开有若干滤液孔，同时支撑板的表面从下到上依次设有超滤膜和密封压圈，密封压圈压紧在超滤膜的表面，所述RNA裂解缓冲液包含两个组分，组分一各成份重量百分比为：40-55％水饱和苯酚、40-60％异硫氰酸胍、0.5-2.5％醋酸钠、0.1-2％巯基乙醇、0-0.3％8-羟基喹啉，pH值为4.0-4.5；pH值为4.0-4.5；组分二的成分为氯仿。