[发明专利]一种同时分析生物组织中多种胺类代谢物的质谱成像方法

说明书

本发明提供一种同时分析生物组织多种胺类代谢物的MALDI质谱成像方法，属于质谱检测技术领域。所述多种胺类代谢物为胆碱、甘油磷酸胆碱、肉碱、乙酰肉碱、丙酰肉碱、组胺、精胺、亚精胺、甜菜碱、丁酰肉碱、戊酰肉碱、C18:0肉碱、乙酰胆碱、肌酸、组氨酸、磷酸胆碱(共计16种)，该方法操作简便、灵敏度高、重复性好，可以用于生物组织中胺类代谢物的可视化表征，因此具有良好的实际应用之价值。

技术领域

本发明属于质谱检测技术领域，具体涉及一种同时分析生物组织中多种胺类代谢物的质谱成像方法。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

生物组织具有非常复杂的结构和功能，也是大多数生物学功能发挥、疾病发生发展的靶部位。其中，胺类代谢物作为生物组织的重要组成分子，在细胞生物膜形成、细胞间信号转导及能量代谢中发挥着重要的作用。对生物组织中胺类代谢物进行原位分析，掌握机体生理和病理条件下胺类代谢物的分布和变化特征，能够更深层次地理解胺类代谢物在生命活动及病变过程中的作用和机制。

Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization(MALDI)质谱成像技术是表征生物组织中分子空间分布的一种重要技术手段。MALDI以激光为探针对组织中所含的多种分子按空间位置逐点进行扫描检测，获得其离子强度与位置关系的多维数据阵，然后通过数据处理软件对不同质荷比(m/z)的离子按照其强度和空间位置进行重构和可视化，最终实现多种分子的同时成像分析。尽管MALDI可以在数微米的空间分辨率下实现组织中脂质、多肽、蛋白等的原位分析，但是发明人发现，由于MALDI质谱成像技术的灵敏度不足以及样品准备阶段需要在组织切片上喷涂基质，容易造成低质量区(m/z700)产生非常强的聚合峰，严重地影响了目标胺类代谢物的质谱成像分析。因此如何提高检测灵敏度，实现生物组织中小分子胺类代谢物的高覆盖原位分析，仍然是MALDI质谱成像分析面临的巨大挑战。

发明内容

针对上述现有技术的不足，本发明提供一种同时分析生物组织多种胺类代谢物的MALDI质谱成像方法，所述多种胺类代谢物为胆碱、甘油磷酸胆碱、肉碱、乙酰肉碱、丙酰肉碱、组胺、精胺、亚精胺、甜菜碱、丁酰肉碱、戊酰肉碱、C18:0肉碱、乙酰胆碱、肌酸、组氨酸、磷酸胆碱(共计16种)，该方法操作简便、灵敏度高、重复性好，可以用于生物组织中胺类代谢物的可视化表征。

本发明基于以下技术方案实现上述技术目的：

本发明的第一个方面，提供一种同时分析生物组织中多种胺类代谢物的质谱成像方法，所述方法包括：

将新鲜生物组织制冰冻切片转移至导电载玻片上，抽真空后进行冰丙酮处理；

将基质溶液喷涂至冰丙酮处理后的组织切片上，进行MALDI质谱成像分析。

进一步的，冰冻切片的厚度为10～18微米(优选12毫米)；

进一步的，所述导电载玻片为ITO-氧化铟锡导电载玻片；

进一步的，所述冰丙酮处理具体方法为：将冰冻切片置于冰丙酮中震荡处理，震荡转速为40～80次/分钟(优选60次/分钟)，震荡时间为1-15分钟(优选为15分钟)；

进一步的，所述基质溶液中基质为1,5-二氨基萘；溶剂为乙腈和水的混合物，优选为乙腈-水(1:1，v/v)；更进一步的，所述基质溶液配制浓度为1～5mg/mL(优选为2.5mg/mL)；

进一步的，喷涂处理具体条件为：喷涂速率为0.05～0.15mL/分钟，喷涂温度为40～60℃，喷嘴轨道速度为750～850mm/分钟，喷嘴轨道间距为2～5mm，循环次数为6～12次；