[发明专利]一种慢病毒转染囊胚滋养层细胞研究其基因功能的方法有效
| 申请号： | 201910315163.1 | 申请日： | 2019-04-18 |
| 公开（公告）号： | CN109975264B | 公开（公告）日： | 2022-04-08 |
| 发明（设计）人： | 曹祖兵;童旭;张丹丹;王怡青;宁伟;齐昕;高迪;许腾腾;张运海 | 申请（专利权）人： | 安徽农业大学 |
| 主分类号： | G01N21/64 | 分类号： | G01N21/64;G01N1/28 |
| 代理公司： | 合肥云道尔知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 34230 | 代理人： | 司楠 |
| 地址： | 230000 *** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 病毒 转染 囊胚 滋养 细胞 研究 基因 功能 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种慢病毒转染囊胚滋养层细胞研究其基因功能的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)培养碟的制备：
取20.83uL胚胎培养液置于离心管中，加入1uL慢病毒，吹打混匀；再将胚胎培养液在培养皿中做培养滴，并加入3mL矿物油，将培养皿放在培养箱平衡3-5h；
(2)慢病毒转染囊胚
①挑选质量相同的扩张囊胚，去除囊胚最外层的透明带；
②用胚胎培养液将去除透明带后的囊胚清洗干净；
③把清洗好的囊胚置于步骤(1)制得的培养碟中，转染10-14h；
④用DPBS液体将囊胚清洗干净，并用4％PFA固定10-30min，再用DPBS清洗干净；
⑤DAPI染核，压片。
2.根据权利要求1所述的慢病毒转染囊胚滋养层细胞研究其基因功能的方法，其特征在于，步骤(1)中，培养箱内的温度为38.5℃，CO2的体积分数为5％。
3.根据权利要求1所述的慢病毒转染囊胚滋养层细胞研究其基因功能的方法，其特征在于，步骤(1)中，培养皿放在培养箱平衡4h。
4.根据权利要求1所述的慢病毒转染囊胚滋养层细胞研究其基因功能的方法，其特征在于，步骤(2)中，囊胚最外层的透明带是通过链霉蛋白酶去除。
5.根据权利要求1所述的慢病毒转染囊胚滋养层细胞研究其基因功能的方法，其特征在于，步骤(2)中，转染的时间为12h。
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