[发明专利]琼脂糖酶基因、重组质粒、重组菌株、琼脂糖酶及其应用

说明书

本发明公开一种琼脂糖酶基因、重组质粒、重组菌株、琼脂糖酶及其应用，涉及基因工程技术领域。所述琼脂糖酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；所述琼脂糖酶基因caAgaA的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；所述重组质粒携带所述琼脂糖酶基因caAgaA；所述重组菌株包含所述琼脂糖酶基因caAgaA。本发明提供的琼脂糖酶具有较好的热稳定性和pH稳定性，可用于新琼寡糖的制备以及琼脂糖凝胶后的核酸回收。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，特别涉及一种琼脂糖酶基因、重组质粒、重组菌株、琼脂糖酶及其应用。

背景技术

琼脂是一种来源于红藻细胞壁中的杂多糖，主要由由琼脂糖和琼脂胶两种多糖组成。琼脂或者琼脂糖经琼脂糖酶水解可以得到具有生物活性的寡糖物质，利用琼脂糖酶的这一特性，琼脂糖酶在工业生产中和生物学研究中均具有重要的应用价值。

然而，在工业生产以及生物学研究中，往往存在以下问题：琼脂糖酶往往对固体底物活性很差，但琼脂糖液化温度却高于60℃；颗粒状酶功效更佳，但酶产品在颗粒化时需要经历80℃高温过程；此外，在工业化生产时pH环境也会随着工艺条件发生变化，但目前已有的琼脂糖酶对高温以及酸碱性环境的适应性均较差，并不能适应上述应用场景，这极大地限制了琼脂糖酶的应用和发展，因此，需要发掘出具有良好的热稳定性和pH稳定性的琼脂糖酶。

发明内容

本发明的主要目的是提出一种琼脂糖酶基因、重组质粒、重组菌株、琼脂糖酶及其应用，旨在提供一种琼脂糖酶，该琼脂糖酶具有较好的热稳定性和pH稳定性。

为实现上述目的，本发明提出一种琼脂糖酶，所述琼脂糖酶的氨基酸序列如SEQID NO：2所示。

本发明还提出一种琼脂糖酶基因caAgaA，用于编码上述琼脂糖酶，所述琼脂糖酶基因caAgaA的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

本发明还提出了一种重组质粒，携带权利要求2所述的琼脂糖酶基因caAgaA。

优选地，所述重组质粒包含表达载体pET-28a。

本发明还提出了一种重组菌株，包含上述的琼脂糖酶基因caAgaA。

优选地，所述重组菌株由包含上述的琼脂糖酶基因caAgaA的重组质粒转化大肠杆菌BL21(Rosetta)获得。

此外，本发明还提出了上述的琼脂糖酶在新琼寡糖的制备中的应用。

以及，本发明还提出了上述的琼脂糖酶在琼脂糖凝胶电泳后的核酸回收中的应用。

本发明技术方案中，提供了琼脂糖酶基因caAgaA、携带该基因的重组质粒以及重组菌株，该琼脂糖酶基因caAgaA可以编码出一种琼脂糖酶，所述琼脂糖酶不仅具有较高的催化活性，可有效地将琼脂或琼脂糖水解为4和6个残基的新琼寡糖，从而可用于生物活性新琼寡糖的制备，而且具有极佳的热稳定性和pH稳定性，从而拓展了琼脂糖酶的应用场景，降低了其应用时的工艺难度，减少了投入成本，因此，本发明提供的琼脂糖酶在工业生产中具有更强的适用性。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅为本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为本发明提供的琼脂糖酶的SDS-PAGE测试结果图；

图2为本发明提供的琼脂糖酶在不同pH值下的酶活测定结果图；

图3本发明提供的琼脂糖酶在不同pH值下的稳定性测试结果图；

图4为本发明提供的琼脂糖酶在不同温度下的酶活测定结果图；