[发明专利]通过有效转录终止来改进RNA的产生和递送的组合物和方法

权利要求书

1.一种转录终止子序列，其包含选自SEQ ID NO:13、18和21-23的核酸序列。

2.一种工程化表达构建体，其包含：

a.启动子；

b.位于所述启动子的转录下游的第一核酸序列，其中所述第一核酸序列编码dsRNA、调控RNA或蛋白质；和

c.位于所述第一核酸序列的3’的第二核酸序列，其中所述第二核酸序列包含权利要求1所述的转录终止子序列；

d.其中所述第一核酸序列和第二核酸序列可操作地连接于所述启动子。

3.根据权利要求2所述的工程化表达构建体，其中所述启动子选自由以下组成的组：T7、T3、SV40、SP6、T5、β-内酰胺酶启动子、大肠埃希氏菌半乳糖启动子、阿拉伯糖启动子、碱性磷酸酶启动子、色氨酸(trp)启动子、乳糖操纵子(lac)启动子、lacUV5启动子、trc启动子和tac启动子。

4.根据权利要求2所述的工程化表达构建体，其中所述启动子选自由以下组成的组：RNA Pol I启动子、RNA Pol II启动子或RNA Pol III启动子。

5.根据权利要求4所述的工程化表达构建体，其中所述RNA Pol III启动子选自由以下组成的组：U6启动子、tRNA启动子、逆转录病毒LTR启动子、腺病毒VA1启动子、5Sr RNA启动子、7SK RNA启动子、7SL RNA启动子和H1RNA启动子。

6.根据权利要求2所述的工程化表达构建体，其中所述构建体进一步包含一个或多个增强子或多腺苷酸化序列。

7.根据权利要求2所述的工程化表达构建体，其中所述构建体的转录实现至少60％的终止效率。

8.根据权利要求2所述的工程化表达构建体，其中所述第一核酸序列选自由以下组成的组：SEQ ID NO:2、4、14、15和20。

9.一种细菌宿主细胞，其包含权利要求2所述的工程化表达构建体。

10.根据权利要求9所述的细菌宿主细胞，其中所述细菌宿主细胞不表达RNA酶A。

11.根据权利要求9所述的细菌宿主细胞，其中所述细菌宿主细胞是大肠埃希氏菌细胞。

12.根据权利要求11所述的细菌宿主细胞，其中所述大肠埃希氏菌细胞是RNA酶III缺陷型。

13.根据权利要求9所述的细菌宿主细胞，其中所述细菌宿主细胞是死亡且未裂解的。

14.一种提高RNA产量的方法，其包括向宿主细胞提供权利要求2所述的工程化表达构建体。

15.一种提高蛋白质产量的方法，其包括向宿主细胞提供权利要求2所述的工程化表达构建体。