[发明专利]检测多奈哌齐血药浓度的方法

说明书

本发明提供一种检测多奈哌齐血药浓度的方法：取待测血液，离心，获得血浆；向血浆中加入二甲基亚砜、震荡，再加入三氯乙酸溶液沉淀蛋白、震荡，离心，收集上清液；取上清液，加入三乙胺‑磷酸溶液，震荡，获得待测液；取不含有多奈哌齐的对照血液，离心，获得血浆；向血浆中加入多奈哌齐二甲基亚砜溶液、震荡，再加入三氯乙酸溶液沉淀蛋白、震荡，离心，收集上清液；取上清液，加入三乙胺‑磷酸溶液，震荡，制备含多奈哌齐浓度梯度的参比液；依次将待测液、含多奈哌齐浓度梯度的参比液加入微流控芯片的样品池中，采用非接触电导法检测。本发明方法，具有较好的电泳分离检测多奈哌齐的重现性及实用性。

技术领域

本发明涉及微流控芯片血药浓度监测应用领域，特别是涉及一种检测多奈哌齐血药浓度的方法。

背景技术

微流控芯片非接触电导法检测是现代分析仪器发展的重要方向之一。微流控芯片具有体积小、样品和试剂消耗少、分析速度快、样品处理简单、分离效能高等特点。非接触电导法为用于微流控芯片的一种检测器，为电导检测的改进型，电导检测器通过测定分析物的电导变化实现检测，主要用于检测可电离物质的阴阳离子，具有线性范围宽、选择性好、易于集成化微型化、检测电路结构简单、成本低、信号噪声小等特点。非接触电导检测器直接将检测电极放置在分离通道的芯片外表面，避免电极与待测溶液的直接接触，可以更加有效的消除高压分离电场对检测干扰及电极污染，不仅拥有电导检测的优点，而且避免了溶液以及电场的干扰。

阿尔茨海默病是一种神经退行性疾病，病变基础为大脑皮质、海马等中枢神经细胞功能退化，临床以高级认知功能下降为主，表现为不同程度记忆力、判断力、定向力等下降，常伴有进行性日常生活能力减退、情感反应障碍。胆碱酯酶抑制剂是目前临床治疗阿尔茨海默病首选的一类药物，其机制为通过抑制胆碱酯酶活性，增加大脑皮质和海马的乙酰胆碱神经递质，改善神经-神经突触功能障碍及细胞死亡或功能退化所致乙酰胆碱递质的减少。盐酸多奈哌齐是中枢神经系统乙酰胆碱酯酶选择性抑制剂，能够提高中枢神经系统，特别是大脑皮质和基底核神经突触中乙酰胆碱浓度，从而改善认知功能，是阿尔茨海默病首选治疗方案的药物。

目前由于多奈哌齐溶解度小，血浆蛋白结合率高，需要极高的检测灵敏度，血浆药物检测难度大，所以目前大部分多奈哌齐血浆药物浓度检测方法为高效液相色谱法联合质谱法，而高效液相色谱法联合质谱法具有仪器昂贵，检测成本高，仪器庞大不易移动等缺点，难以满足市场需求。而微流控芯片非接触电导法是一种高效的、高速，便携且低成本的检测方法。但是，采用微流控芯片非接触电导法检测多奈哌齐的血药浓度时往往伴随检测重现性差以及灵敏度低的问题，该问题不利于多奈哌齐药物相关的科研、医院临床治疗药物浓度监测需要。

因此，亟待研发一种检测重现性好、灵敏度好的而且可以满足实际检测需要的微流控芯片非接触电导法检测多奈哌齐的血药浓度方法。

发明内容

基于此，本发明的主要目的是提供一种重现性好、灵敏度好而且可以满足实际检测需要的检测多奈哌齐的血药浓度方法。

本发明的主要目的是通过以下技术方案实现的：

一种检测多奈哌齐血药浓度的方法，所述的方法包括：

(1)待测液制备：取待测血液，离心，获得血浆；向所述血浆中加入二甲基亚砜溶液、震荡，再加入三氯乙酸溶液沉淀蛋白、震荡，离心，收集上清液；取所述上清液，加入三乙胺溶液、磷酸溶液，震荡，获得待测液；

(2)参比液制备：取不含有多奈哌齐的对照血液，离心，获得血浆；向所述血浆中加入含多奈哌齐的二甲基亚砜溶液，震荡，再加入三氯乙酸溶液沉淀蛋白、震荡，离心，收集上清液；取所述上清液，加入三乙胺溶液、磷酸溶液，震荡，制备含多奈哌齐浓度梯度的参比液；所述含多奈哌齐的二甲基亚砜溶液与步骤(1)加入的所述二甲基亚砜溶液体积相等；

(3)检测：将所述待测液或所述含多奈哌齐浓度梯度的参比液加入微流控芯片的样品池中，加入含有二甲基亚砜的缓冲溶液，采用非接触电导法检测。