[发明专利]检测多奈哌齐血药浓度的方法有效
申请号: | 201910284524.0 | 申请日: | 2019-04-10 |
公开(公告)号: | CN109946364B | 公开(公告)日: | 2021-03-16 |
发明(设计)人: | 杨秀娟;李智磊;陈缵光;王勇 | 申请(专利权)人: | 南方医科大学珠江医院 |
主分类号: | G01N27/447 | 分类号: | G01N27/447 |
代理公司: | 广州华进联合专利商标代理有限公司 44224 | 代理人: | 向薇;万志香 |
地址: | 510280 广*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 检测 多奈哌齐血药 浓度 方法 | ||
1.一种检测多奈哌齐血药浓度的方法,其特征在于,所述的方法包括:
(1)待测液制备:取待测血液,离心,获得血浆;向所述血浆中加入二甲基亚砜溶液、震荡,再加入三氯乙酸溶液沉淀蛋白、震荡,离心,收集上清液;取所述上清液,加入三乙胺溶液、磷酸溶液,震荡,获得待测液;
(2)参比液制备:取不含有多奈哌齐的对照血液,离心,获得血浆;向所述血浆中加入含多奈哌齐的二甲基亚砜溶液,震荡,再加入三氯乙酸溶液沉淀蛋白、震荡,离心,收集上清液;取所述上清液,加入三乙胺溶液、磷酸溶液,震荡,制备含多奈哌齐浓度梯度的参比液;所述含多奈哌齐的二甲基亚砜溶液与步骤(1)加入的所述二甲基亚砜溶液体积相等;
(3)检测:将所述待测液或所述含多奈哌齐浓度梯度的参比液加入微流控芯片的样品池中,加入含有二甲基亚砜的缓冲溶液,采用非接触电导法检测;
步骤(1)、步骤(2)和步骤(3)中,所述二甲基亚砜溶液的体积浓度为0.5-5%;
步骤(3)中,所述的缓冲溶液由三乙胺溶液、磷酸溶液组成,其中三乙胺溶液与磷酸溶液的浓度分别为0.9~150mmol/L、0.3~50mmol/L且浓度比值大于等于3;
步骤(1)和步骤(2)中,所述的上清液、三乙胺溶液、磷酸溶液的体积比为8:(1~2):(0.3~0.6),所述的三乙胺溶液的浓度范围为50~150mmol/L,所述磷酸溶液的浓度为50~150mmol/L,加入三氯乙酸溶液沉淀蛋白、震荡后离心所采用的条件为:8000~12000rpm、20~30min。
2.根据权利要求1所述的检测多奈哌齐血药浓度的方法,其特征在于,步骤(1)和/或步骤(2)中,所述的三乙胺溶液的浓度范围为75~125mmol/L,所述磷酸溶液的浓度为75~125mmol/L,加入三氯乙酸溶液沉淀蛋白、震荡后离心所采用的条件为:9000~11000rpm、23~27min。
3.根据权利要求1所述的检测多奈哌齐血药浓度的方法,其特征在于,步骤(3)中,所述的缓冲溶液由三乙胺溶液、磷酸溶液组成,其中三乙胺溶液与磷酸溶液的浓度分别为3~30mmol/L、1~10mmol/L且浓度比值大于等于3。
4.根据权利要求1所述的检测多奈哌齐血药浓度的方法,其特征在于,步骤(1)和/或步骤(2)和/或步骤(3)中,所述二甲基亚砜的体积浓度为1~3%。
5.根据权利要求2所述的检测多奈哌齐血药浓度的方法,其特征在于,步骤(1)和/或步骤(2)中,所述的上清液、三乙胺溶液、磷酸溶液的体积比为8:1.5:0.5,所述的三乙胺溶液的浓度为100mmol/L,所述磷酸溶液的浓度为100mmol/L,加入三氯乙酸溶液沉淀蛋白、震荡后离心所采用的条件为:10000rpm、25min。
6.根据权利要求3所述的检测多奈哌齐血药浓度的方法,其特征在于,步骤(3)中,所述的缓冲溶液由三乙胺溶液、磷酸溶液组成,其中三乙胺溶液与磷酸溶液的浓度分别为15mmol/L、5mmol/L。
7.根据权利要求4所述的检测多奈哌齐血药浓度的方法,其特征在于,步骤(1)和/或步骤(2)和/或步骤(3)中,所述二甲基亚砜的体积浓度为2%。
8.根据权利要求1至7任一项所述的检测多奈哌齐血药浓度的方法,其特征在于,步骤(3)包括如下步骤:
1)取微流控芯片,加入缓冲液,使所述微流控芯片的样品池、样品废液池、缓冲液储存池、缓冲液废液池、进样通道和分离通道均充满缓冲液;
2)吸去所述样品池、缓冲液储存池中的所述缓冲液;
3)向缓冲液储存池中加入添加有体积分数不低于10%的乙醇的所述缓冲液,向样品池中加入所述待测液或含多奈哌齐浓度梯度的参比液;
4)插入电极,以样品池为正极、样品废液池为负极进行进样,所述进样结束后,以缓冲液储存池为正极、缓冲液废液池为负极进行分离;所述进样、分离结束后再重复所述进样、分离至少一次,获得检测结果;
所述缓冲液选用前述步骤(3)含有二甲基亚砜的缓冲溶液。
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