[发明专利]一种重组脂肪酶在拆分(R,S)-α-乙基-2-氧-1-吡咯烷乙酸甲酯中的应用

权利要求书

1.一种重组脂肪酶在拆分(R,S)-α-乙基-2-氧-1-吡咯烷乙酸甲酯中的应用，其特征在于所述重组脂肪酶的氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述重组脂肪酶的编码基因核苷酸序列为SEQID NO.2所示。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述应用为：以含重组脂肪酶编码基因的工程菌经发酵培养获得的湿菌体冻干粉为催化剂，以(R,S)-α-乙基-2-氧-1-吡咯烷乙酸甲酯为底物，以pH 7.0缓冲液为反应介质，在20-45℃、600-1000rpm条件下进行拆分反应，反应完全后，将反应液分离纯化，获得(S)-α-乙基-2-氧-1-吡咯烷乙酸。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述催化剂用量以缓冲液体积计为5-10g/L，所述底物终浓度以缓冲液体积计为1%-10%。

5.如权利要求3所述的应用，其特征在于反应时间为5-60min。

6.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述反应条件为35℃、1000rpm反应10min。

7.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述缓冲液为pH 7.0，0.2 mM的Na2HPO4/NaH2PO4缓冲溶液。

8.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述催化剂按如下方法制备：将含重组脂肪酶编码基因的工程菌接种在LB培养基中，37℃培养OD600至0.4-0.6，加IPTG至终浓度0.02mM，30℃培养10-12 h，菌液8000 rpm，4℃离心10 min，收集菌体，再用PBS缓冲液洗涤菌体2次，8000 rpm，4℃离心10 min，收集菌体，冻干，得到重组脂肪酶冻干粉，即为催化剂。

9.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述反应液分离纯化的方法为：反应结束后，将反应液离心，取上清液，用2 mol/L的NaOH溶液调pH至8.0，加入与总体积等量的乙酸乙酯充分振荡，除去上层有机相，取下层水相，用4 mol/L的盐酸调pH至2.0；再加入与水相等体积的乙酸乙酯充分振荡，弃水层，在45 ℃下减压蒸馏至无馏出物，得到产物(S)-α-乙基-2-氧-1-吡咯烷乙酸。