[发明专利]一种柯萨奇病毒A6型和A10型IgM抗体联合检测的试剂条及其制备方法

说明书

本发明提供了一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体检测的试纸条及其制备方法，第一样品垫层为滤血膜，滤血膜表面凹凸不平，通过物理吸附作用滞留红细胞；再经过第二样品垫层，其预处理液在PBS缓冲液体系基础上加入兔抗人红细胞多克隆抗体，可与人红细胞特异结合，进一步消除全血样本中的红细胞，实现了全血样本的检测。

技术领域

发明涉及体外诊断技术领域。

具体地说，是涉及一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体检测的试纸条及其制备方法。

背景技术

手足口病（hand，foot and mouth disease，HFMD）是一种婴幼儿人群常见的急性传染病，是以发热和手、足、口腔出现皮疹、疱疹和小溃疡为临床表现的传染性疾病，多发于５岁以下儿童。少数患者可出现无菌性脑膜炎、脑炎及急性弛缓性麻痹等中枢神经系统症状的严重并发症，严重者可导致死亡。自2008年我国HFMD大流行后，HFMD已成为我国严重的公共卫生问题之一。截至2018年4月，全国已报道HFMD发病1644.8万例，婴幼儿死亡3545例。

近年来，中国大陆地区引起手足口病的主要病原体是肠道病毒71(EV71)和柯萨奇病毒A16(CoxA16)。然而，自2008年开始，柯萨奇病毒A6(CoxA6)在部分地区逐渐出现并成为引发手足口病暴发流行的优势菌株。CoxA6和CoxA10均属于小核糖核酸病毒科的肠道病毒属。病毒颗粒为二十面立体结构的球形或卵圆形，直径22～30nm，呈圆形颗粒状。

自2008年在新加坡的暴发流行，CoxA6和CoxA10成为手足口病的主要致病血清型，共占该病的35.3%。2010年中国台湾和日本手足口病大暴发的主要病原是CoxA6。2012年印度手足口病的主要病原是CoxA6和CoxA16，而EV71和CoxA10则次之。2013年以前，中国多地区暴发流行的手足口病病原以EV71和CoxA16为主，CoxA6和CoxA10次之。2013年以后，CoxA6和CoxA10相关的手足口病的比例逐渐上升，成为国内手足口病感染的优势病原体。

目前，我国的手足口病病原诊断市场，仍然以检测肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型为主，也出现了检测柯萨奇病毒A6、A10型的荧光定量试剂盒，如专利《一种检测柯萨奇病毒A6、A10型的荧光定量试剂盒》，专利号（201410012004.1）。虽然聚合酶链反应（PCR）检测快速、特异性和敏感性高，但其高敏感性也使PCR法对实验环境和仪器要求比较高，存在着技术条件要求高、操作复杂、不易普及的问题，一般基层实验室难以开展，且价格也相对较高。同时，由于手足口病的易感人群为5岁以下儿童，检测抗原需要取咽拭子，检测抗体需取全血，对于幼儿来说，明显取指尖血更易操作，但指尖取血量最多不超过40µL。因此，对IgM抗体检测试剂盒的要求必须灵敏度高、取血量少。由于乳胶颗粒粒径大可提高灵敏度，对样品垫处理以过滤红细胞实现全血检测，同时样本稀释液中加入消除假阳成分，最终设计开发出一种特异针对柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体的快速检测试剂。

发明内容

发明的目的在于克服上述传统技术的不足之处，提供一种能同时检测柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体，检测灵敏度高、全血用量少，满足幼儿快速检测需要的一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体检测的试纸条及其制备方法。

发明的目的是通过以下技术措施来达到的：一种柯萨奇病毒A6、A10型IgM抗体检测的试纸条，所述试纸条包括基层，其特征在于：所述基层上依次设有样品垫层、乳胶层、硝酸纤维素膜和吸水层；所述乳胶层为固相有鼠抗人IgM单克隆抗体的聚酯膜；且所述乳胶层的上方覆盖设有白贴。

作为一种改进，所述样品垫层包括固定在所述基层上的第一样品垫层，所述第一样品垫层为滤血膜；固定在所述基层上且覆盖在所述第一样品垫层上方的第二样品垫层；所述第二样品垫层的面积大于所述第一样品垫层的面积，所述第二样品垫层为经过样品垫层预处理液处理的垫层。