[发明专利]一种怀菊组织培养快速育苗方法

权利要求书

1.一种怀菊组织培养快速育苗方法，其特征在于，包括以下步骤:

1）怀菊无菌苗的获得：采集2～3cm的怀菊顶芽，0.1%的升汞消毒3min，灭菌水冲洗5～6遍，将其接种于第一固体培养基上，调pH值为5.8，放置在22-24℃、相对湿度60%、光强1500-2000lx、光照时间12 h·d-1的条件下进行培养；

2）组培快繁：剪取健壮怀菊组培苗的幼嫩叶片0.5cm×0.5cm，仍将其接种于第一固体培养基上，使第一固体培养基pH值为5.8，放在无菌室培养出芽丛，再将芽接种于第二固体培养基，调pH值为5.8，放置在22-24℃、相对湿度60%、光强1500-2000lx、光照时间12 h·d-1的条件下进行生根培养；

3）炼苗：幼苗长到5cm高的时候，可以将其瓶口打开，进行炼苗5-7天，洗净根部的培养基之后，移栽到药用植物园的室外大棚，大棚内温度25～27℃，湿度为60%～80%，种植于pH值为6.5～7的营养土、蛭石比例为1:2的混合基质中，置于阴凉通风处，用水浇透；所述的营养土组成为全氮0.68g/L、五氧化二磷0.27g/L、氧化钾0.36g/L组成；

4）大田移植：炼苗一月后，移植入大田，选取肥沃疏松，排水良好的壤土为宜，将过长的根、老根及苗的顶端切掉，根保留6～7cm，地上部分保留14-16cm，按行距40cm，株距30cm，开穴6～10cm深，每穴1株，栽后覆土压实，并及时浇水；

所述的第一固体培养基为1L的MS培养基中加入0.5mg的6-BA、0.1mg的NAA、30g蔗糖、6.5g琼脂制成；

所述的第二固体培养基为每1L的1/2MS培养基中加入0.1mg的IBA、0.05mg的NAA、30g蔗糖、6.5g琼脂。

2.根据权利要求1所述的怀菊组织培养快速育苗方法，其特征在于，所述的步骤1）中，将消毒灭菌后的顶芽接入第一固体培养基时，使顶芽底部接触培养基，叶片不接触，每瓶接种5个顶芽，使间距为1.5-2.5cm。

3.根据权利要求1所述的怀菊组织培养快速育苗方法，其特征在于，所述的步骤3）中，洗净组培苗根部的培养基之后，在多菌灵溶液中浸泡15min，再移栽。

4.根据权利要求1所述的怀菊组织培养快速育苗方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）怀菊无菌苗的获得：采集2～3cm的怀菊顶芽，0.1%的升汞消毒3min，灭菌水冲洗5～6遍，在150ml的锥形瓶中装入50ml第一固体培养基，接种量为5个，调pH值为5.8，放置在22-24℃、相对湿度60%、光强1500-2000lx、光照时间12 h·d-1的条件下进行培养；

2）组培快繁：剪取健壮怀菊组培苗的幼嫩叶片0.5cm×0.5cm，仍将其接种于150ml锥形瓶中装入的50ml第一固体培养基上，接种量为5个，使第一固体培养基pH值为5.8，放在无菌室培养5天后出芽，18天后芽诱导率达100%，增殖倍数可达9～10，再将芽接种于150ml的锥形瓶中装入的50ml第二固体培养基上，接种量为5个，调pH值为5.8，放置在22-24℃、相对湿度60%、光强1500-2000lx、光照时间12 h·d-1的条件下进行生根培养，7天后即生根，三周后生根率达100%，根长度平均可达7.2cm；

3）炼苗：幼苗长到5cm高的时候，可以将其瓶口打开，进行炼苗5-7天，洗净根部的培养基之后，移栽到药用植物园的室外大棚，大棚内温度25～27℃，湿度为60%～80%，种植于pH值为6.5～7的营养土、蛭石比例为1:2的混合基质中，一斤混合基质种植2-3颗苗，置于阴凉通风处，用水浇透，所述的营养土组成为全氮0.68g/L、五氧化二磷0.27g/L、氧化钾0.36g/L组成；

4）大田移植：炼苗一月后，移植入大田，选取肥沃疏松，排水良好的壤土为宜，将过长的根、老根及苗的顶端切掉，根保留6～7cm，地上部分保留14-16cm，按行距40cm，株距30cm，开穴6～10cm深，每穴1株，栽后覆土压实，并及时浇水。