[发明专利]一种脂肪组织中的血管基质成分的提取方法及应用

说明书

本发明实施例提供了一种脂肪组织中的血管基质成分的提取方法及应用。本发明实施例通过抽吸、吹打脂肪组织，获得乳糜状的脂肪组织，然后加入等体积的酶解液，在2℃‑8℃的温度条件下振荡消化所述脂肪组织以获取SVF。通过采用机械剪切和低温酶解结合的方法处理所述脂肪组织，能够提高获取的SVF的干/祖细胞得率。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种脂肪组织中的血管基质成分的提取方法及应用。

背景技术

脂肪组织中的血管基质成分(Stromal Vascular Fraction，SVF)是脂肪组织经消化、过滤祛除成熟的脂肪组织得到且包括如内皮前体细胞、间充质干细胞、平滑肌细胞和脂肪细胞等多种细胞成分，可诱导分化为脂肪组织、成软骨细胞和成骨细胞的细胞复合体。

目前，SVF己在多种组织再生修复和疾病治疗动物模型中己展现出良好的应用效果，主要包括辅助脂肪移植并促进脂肪存活和再生，在大鼠心梗模型中促进血管新生和损伤修复，降低实验性自身免疫性脑炎中炎症因子水平，促进糖尿病足渍痛部位成纤维细胞增殖和修复以及应用于皮肤烧伤和创面愈合治疗等。

但目前所采用的单一机械法酶法分离SVF的方法普遍存在干/祖细胞得率低的问题，极大地限制了SVF使用功效。因此，研究和开发高效的SVF分离技术，提高干/祖细胞的得率具有重要意义。

发明内容

有鉴于此，本发明实施例提供了一种脂肪组织中的血管基质成分的提取方法，能够提高SVF中的干/祖细胞得率。

本发明实施例的第一方面，提供一种脂肪组织中的血管基质成分的提取方法。

本发明实施例的脂肪组织中的血管基质成分的提取方法包括：

步骤1，采集脂肪组织，加入缓冲液清洗脂肪组织，以去除血细胞；

步骤2，加入缓冲液重悬脂肪组织，离心后吸弃上层油脂；

步骤3，反复抽吸、吹打所述脂肪组织，以获得乳糜状脂肪组织；

步骤4，加入酶解液，在2℃-8℃振荡消化，离心后取沉淀；

步骤5，过滤所述沉淀，在所述沉淀中加入缓冲液后离心，得到血管基质成分。

进一步地，所述加入酶解液具体为，加入与所述脂肪组织等体积的酶解液。

进一步地，所述酶解液为浓度为0.2％的Ⅰ型胶原酶水溶液。

进一步地，所述在4℃振荡消化的具体条件为：在4℃以50～100rpm振荡消化3小时。

进一步地，在步骤4中，所述离心的具体条件为300xg离心10min。

进一步地，过滤所述沉淀具体为用200目筛网过滤所述沉淀。

进一步地，所述缓冲液为磷酸盐缓冲溶液或生理盐水。

进一步地，在所述步骤2中，所述离心的具体条件为：4000rpm离心1min。

进一步地，所述反复抽吸、吹打所述脂肪组织具体为：用无菌注射器反复抽吸、吹打所述脂肪组织。

本发明实施例的第二方面，提供一种脂肪组织中的血管基质成分在制备抗光老化制剂方面的应用。

本发明实施例通过抽吸、吹打脂肪组织，获得乳糜状的脂肪组织，然后加入等体积的酶解液，在4℃的温度条件下振荡消化所述脂肪组织以获取SVF。通过采用机械剪切和低温酶解结合的方法处理所述脂肪组织，能够提高获取的SVF的干/祖细胞得率。

附图说明

通过以下参照附图对本发明实施例的描述，本发明的上述以及其它目的、特征和优点将更为清楚，在附图中：