[发明专利]一种高产热噬地芽胞杆菌芽胞的培养方法

说明书

本发明涉及热噬地芽胞杆菌芽胞培养领域。且公开了一种高产热噬地芽胞杆菌芽胞的培养方法。该高产热噬地芽胞杆菌芽胞的培养方法，包括以下步骤：S1、高温杀菌：取多个培养皿，用清水对培养皿进行冲洗，冲洗完成后，将培养皿放置在压力蒸汽灭菌器内，对培养皿进行高温灭菌，灭菌温度为115℃‑135℃，灭菌时间15min‑40min，灭菌完成后，取出培养皿备用。该高产热噬地芽胞杆菌芽胞的培养方法，以R2A培养基为基础培养基，并向R2A培养基内添加锰离子和硫酸镁的培养方法，显著提高了芽胞生成数量，从而节约了时间和经济成本，使用该方法培养的芽胞浓度可以达到1.55×10⁸cfu/mL，可以有效提高热噬地芽胞杆菌芽胞的收集速率，实现更高效的生产。

技术领域

本发明涉及热噬地芽胞杆菌芽胞培养技术领域，具体为一种高产热噬地芽胞杆菌芽胞的培养方法。

背景技术

热噬地芽胞杆菌是地芽胞杆菌属的一个种。地芽胞杆菌属的菌种均来源于温泉、火山、堆肥等高温环境中，因而其菌种本身以及产生的芽胞均具有极强的耐热性能，其中，嗜热脂肪地芽胞杆菌ATCC7953株已经成为压力蒸汽灭菌生物监测的标准指示菌株。而地芽胞杆菌属的其它菌种研究相对较少，很多耐热性能优越的菌种并未被充分开发利用。热噬地芽胞杆菌由于其芽胞具有极强的耐热性能，因而可以应用在压力蒸汽灭菌的生物监测当中，但通过现有的热噬地芽胞杆菌芽胞培养方法，培养出来的芽胞存活率较低，产量较低，导致热噬地芽胞杆菌应用成本较大。

发明内容

本发明的目的是提供一种高产热噬地芽胞杆菌芽胞的培养方法，具备高效生产等优点，解决了通过现有的热噬地芽胞杆菌芽胞培养方法，培养出来的芽胞存活率较低，产量较低，导致热噬地芽胞杆菌应用成本较大的问题。

技术方案

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种高产热噬地芽胞杆菌芽胞的培养方法，包括以下步骤：

S1、高温杀菌：取多个培养皿，用清水对培养皿进行冲洗，冲洗完成后，将培养皿放置在压力蒸汽灭菌器内，对培养皿进行高温灭菌，灭菌温度为115℃-135℃，灭菌时间15min-40min，灭菌完成后，取出培养皿备用。

S2、制备混合培养基，向培养瓶中加入10-20份R2A培养基，然后分别向R2A培养基内添加3-5份硫酸锰和3-5份硫酸镁，通过搅拌棒进行搅拌，使R2A培养基、硫酸锰和硫酸镁充分混合，搅拌时间为5min-10min。将培养基放置在压力蒸汽灭菌器内，对培养基进行高温灭菌，灭菌温度为115℃-135℃，灭菌时间15min-40min，灭菌完成后，取出培养基，待其冷却至45℃时，倾注平板备用。

S3、培养：向装有混合培养基的培养皿中加入10-15份芽胞，培养温度50℃-65℃，培养时间7-16天。

S4、离心收集：培养完成后，使用无菌棉拭子刮下菌苔，将其悬浮在无菌生理盐水中，将制备的悬液放置在离心机内，通过离心机使培养完成后的芽胞聚集在一起，离心收集的转速为3000-5000r/min，离心收集时间为10min-30min然后将芽胞收集起来。丢弃上清液后，使用无菌生理盐水将其悬浮起来，再次离心，然后丢弃上清液。

S5、杀灭残余菌体：使用超纯水将离心收集的芽胞悬浮起来，在80℃-96℃水浴中，高温震荡处理5min-15min。将处理后的悬液进行离心，收集芽胞后，使用无菌生理盐水重悬，制成热噬地芽胞杆菌芽胞悬液。

优选的，所述硫酸锰的浓度为5mg/L-20mg/L。

优选的，所述硫酸镁的浓度为0.01-0.05g/L。

优选的，包括以下步骤：

S1、高温杀菌：取多个培养皿，用清水对培养皿进行冲洗，冲洗完成后，将培养皿放置在压力蒸汽灭菌器内，对培养皿进行高温灭菌，灭菌温度为121℃，灭菌时间30min，灭菌完成后，取出培养皿备用。