[发明专利]诱导分化细胞成多潜能内胚层干细胞的方法及其应用

说明书

本发明提供了诱导分化细胞成多潜能内胚层干细胞的方法及其应用，具体地，本发明提供了一种诱导人类分化细胞(Differentiated Cell)分化为诱导多潜能内胚层干细胞(smEnSC)的方法，包括步骤：(a)在第一培养条件下，在培养体系中培养分化细胞，从而获得诱导多潜能内胚层干细胞(smEnSC)；其中，所述培养体系包括EGF、A83‑01和CHIR99021。本发明的功能性的诱导多潜能内胚层干细胞具有非常高的分化率和纯度。

技术领域

本发明涉及生物技术和细胞治疗领域。具体地，本发明涉及诱导分化细胞成多潜能内胚层干细胞的方法及其应用。

背景技术

细胞退分化(De-differentiation)特指分化细胞(differentiated cells)在某些外界条件刺激下失去其特有功能并返回上级发育阶段(earlier developmentalstages)，是自然界中普遍存在的现象。退分化获得的前体/干细胞对组织损伤修复等有着重要意义。

hEnSCs在体外能够无限扩增并分化成功能性内胚层衍生细胞，但其生长依赖于小鼠成纤维细胞作为滋养层及高浓度的matrigel，限制了其临床应用。

原代肝实质细胞的退分化现象在其分离培养过程特别明显，许多功能性蛋白基因尤其是参与异物质代谢的一相酶P450家族，在培养的早期迅速丢失。关于人原代肝实质细胞的退分化机制目前尚未明了，然而由于人原代肝实质细胞不易获得、在体外不能长期培养、难以进行遗传操作，因此不适合用于退分化机制的研究。

因此，本领域迫切需要开发一种诱导分化细胞成多潜能内胚层干细胞(smallmolecule induced Endoderm Stem Cells，smEnSCs)的方法。

发明内容

本发明公开了一种诱导分化细胞成多潜能内胚层干细胞(small moleculeinduced Endoderm Stem Cells，smEnSCs)的方法。

本发明公开了一种利用小分子化合物及细胞因子组合诱导分化细胞成多潜能内胚层干细胞(small molecule induced Endoderm Stem Cells，smEnSCs)的方法

本发明还公开了，利用小分子首次在体外诱导分化细胞的退分化，并建立诱导多潜能内胚层干细胞系(smEnSCs)

本发明还公开了，通过优化培养方法，smEnSCs能够不依赖于滋养层细胞在体外无限扩增。

本发明还公开了，建立了smEnSCs在体外分化成肝实质细胞、胆管上皮细胞以及小肠上皮细胞等内胚层衍生细胞的分化体系。

在本发明第一方面，提供了一种诱导人类分化细胞分化为诱导多潜能内胚层干细胞(smEnSC)的方法，其特征在于，包括步骤：

(a)在第一培养条件下，在培养体系中培养分化细胞，从而获得诱导多潜能内胚层干细胞(smEnSC)；其中，所述培养体系包括EGF、A83-01和CHIR99021。

在另一优选例中，所述分化为退分化。

在另一优选例中，所述第一培养条件含有第一培养基。

在另一优选例中，所述第一培养基选自下组：SFD、DMEM、DMEM/F12、或其组合。

在另一优选例中，所述培养体系还包括选自下组的一种或多种添加物：抗坏血酸磷酸镁(Ascorbic Acid Phosphate Magnesium)、L-谷氨酰胺(L-glutamine)、MTG、bFGF。

在另一优选例中，所述分化细胞包括成体细胞。

在另一优选例中，所述成体细胞选自下组：肝实质细胞、胃上皮细胞、胰岛细胞、小肠上皮细胞、或其组合。